• Santé - Blanc, Tampon, ADN

Conservation d'ADN

Malheureusement je n'ai trouvé aucune autre information. Combien je dois peser si je veux une solution de 1L et combien mettre d'EDTA (les formules me suffise je peux faire le calcul par la suite) Et aussi j'ai extrait mon adn avec du sel du vinaigre et je l'ai fait précipité avec de l'éthanol, est-ce que ça des risque d'interférer avec mon tampon Et pour finir, je vais le doser par spectrophotométrie UV, est-ce que mon tampon risque de brouiller l'analyse (même si je fais un blanc).  [...] Normalement pour le dosage on fait un blanc avec le tampon qui contient l'ADN (donc du TE dans votre cas) même si la différence ne sera pas enorme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quantification de l'ADN

Oui pour tout. Dosage de l'ADN au spectrophotomètre à 260 nm de longueur d'onde et cuve en quartz.  [...] le mieux reste de faire le blanc avec le tampon que tu as utilisé pour éluer ton adn. Certains tampons peuvent interférer avec le dosage.  [...]

[Biochimie] Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisé du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montrent que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] La force ionique est un parametre essentiel pour le decrochage de l'ADN des colones, donc oui avec un TE10X tu as toute les chances que l'ADN soit encore dans la colone.  [...]

Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisée du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montre que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] il y a une section biologie dans le forum, ta demande y serait mieux placée.   [...]

[Biologie Moléculaire] Fabrication Solution CTAB

Et là je vois que je n'obtiens pas de pelotte d'ADN. Une fois mon extraction terminée je dose au spectro et j'obtiens des quantités ridicules du genre 12µg/mL...Je pense donc que mon pb vient du fait que la lyse ne se fait pas correctement, donc je dois avoir un pb avec mon tampon CTAB (ce qui est fort probable puisque je n'ai pas de protocole précis pour le réaliser) mais je ne vois pas comment résoudre mon pb.  [...] je relance le sujet car je suis stagiaire en M2 et j'ai du préparer du tampon CTAB pour extraire de l'ADN d'invertébrés marins.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

Est-ce que tu as essayé de prendre ton ADN après extraction et de le faire migrer sur gel histoire de voir la tronche que ça a Ca te permet de voir si tu as vraiment de l'ADN ou si tu as une grosse contamination ARN (chose qui m'est déjà arrivée alors que le Nanodrop semblait correct).  [...] Très franchement, quoi qu'en dise ton superviseur, si tes PCR de contrôle avec les 18s ne fonctionnent pas c'est que ton ADN doit être un peu pourri. Juger de la qualité d'un ADNg sur gel, c'est pas forcément évident voir impossible. De plus, aucun moyen de savoir si tu as un ADN propre (sans aucun inhibiteur éventuel de PCR) sur un gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Conservation de l'adn

Selon vous, combien de temps ces ADN peuvent être conservés dans un bon état, à -20°C, à 4°C Sachant que les ADN bruts sont dans le tampon d'élution du kit d'extraction, et les ADN dilués dans de l'eau DNase-RNase Free.  [...] Si tu as utilisé un kit il n'y a plus de nucleases donc le seul probleme est l'autolyse qui pour l'ADN n'existe quasiment pas a -20°C.  [...]

extraction ADN et tampon phosphate

Bonjour à tous, si on veut extraire de l'ADN des cellules, une des premières étapes est de prendre ces cellules auxquelles on ajoute un tampon phosphate et des les centrifuger. J'aurais voulu savoir à quoi servait ce tampon phosphate merci d'avance.  [...] C'est surtout pour conserver des conditions physiologiques en terme de concentrations ioniques je pense.   [...]

Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN)

Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN).  [...] - NaCl 0,5M. responsable de la plasmolyse des cellules qui libèrent leur contenu qui n'est plus retenu par la paroi pectocellulosique (en sachant qu'on a déjà broyé mécaniquement les fragments) ou pour que le SDS soit soluble dans l'alcool.   [...]

Besoin d'aide pour compréhension d'un article

we used the primer H-1478 of Kocher et al. (1989) and the specific primers E. platyc.-L (5'-GGCCCATGATCAACAGAACT 3') and E. platyc.-H (5'-GCTGGCACGAGATTTACCAA 3'). PCR was done in a 50-microL scale under standard conditions (Kocher et al. 1989). Amplified D-loop DNA was purified by using ultrafree-filters (Millipore, Bedford, MA, USA) and was afterwards used for symmetric cycle sequencing using either the Ready Reaction kit (Amersham, Freiburg, Germany) or the Big-Dye Ready-Reaction kit (Perkin Elmer, Weiterstadt, Germany).   [...] ultrafree-filters. Lors de ce stage j'ai pu utiliser ce genre de kit Nucleospin. Ce sont des microtubes en deux partie avec une membrane de silice au milieu. On met notre amplicon dedans, puis on fixe l'adn sur la silice. On centrifuge pour éliminer tous qui ne se fixe pas sur la silice et on fait plusieurs lavage/centrifugation.  [...]