• Santé - Biologie moléculaire, Mise au point, Conditions

[Biologie Moléculaire] Mise au point des conditions PCR

*Pour 10% de mes gènes environ, je n'ai pas d'amplification. J'ai essayé différentes méthodes. augmentation du volume de réaction, diminution de la quantité d'ADN, baisse du Tm de 58 à 56°C. Rien n'a fonctionné, je cherche donc d'autres méthodes qui pourraient améliorer mes conditions PCR.  [...] *La plupart de mes gènes appartiennent à des familles multigéniques. Pour 30% de mes amplifications, je me retrouve donc avec plusieurs bandes. Est-il possible de ne récupérer qu'une seule bande rien qu'en changeant les conditions PCR ou part un autre manière.  [...]

[Biologie Moléculaire] mise au point PCR, RT et QPCR

Voilà on m'a demandé de mettre au point ces différents techniques, surtout de les optimiser (afin de faire baisser les coûts des réactions). Nous travaillons sur du végétal (feuilles, cellule épidermiques et racines) et nous faisons de l'expression de gènes en rt-qPCR semi quantitative.  [...] Et pour la QPCR Nous travaillons actuellement en SYBRgreen sur 20 uL (kit Brilliant III d'Agilent), baisser la quantité de mix optimiser la concentration en primers Je pensais faire ça sur des gènes de rref qui sortent bien tout le temps...Bien entendu on ne doit pas perdre en robustesse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mise au point PCR en Temps Réel

j'ai réalisé ça dans un lightcycler de roche, vu que le but est de mettre au point les PCR je pense qu'il faut que je dise si mes PCR fonctionne bien pour ensuite commencer une vrai quantification d'ARN. quest ce qui me permet de dire si une PCR est bien mise au point.  [...] La spécificité est donné par la courbe de fusion qui est dF/dt (où F est l'intensité de fluo, et t le temps) = f(T) (où T est la température). As-tu utilisé un gène de référence dot l'expression ne varie pas entre tes différentes conditions.  [...]

[Biologie Moléculaire] Etapes de mise au point qPCR - gène peu exprimé

Je n'ai jamais eu de réelle formation qPCR, et j'aimerais qu'on partage nos expériences. Je vais vous raconter les étapes de mise au point de ma qPCR sur un gène peu exprimé dans les cellules de peau, et j'aimerais bien vos commentaires, ce que vous auriez fait de plus ou de moins, ou différemment.  [...] Vous pouvez sinon tester d'autres conditions, en jouant sur la température, concentration d'amorces et [MgCl2]. Ca peut jouer mais un peu, je serais très surpris que vous gagniez 10 ou 15 Ct comme cela (vos Housekeeping sortent vers combien au juste pour parfaitement ).  [...]

[Divers] Niveau thèse: choisir ses Ac pour marquage 4 couleurs au confocal

je suis en thèse d'immuno et en train de mettre au point un marquage 4 couleurs sur coupes congelées murines pour observation au confocal. Je maitrise la technique du marquage... J'aurais besoin d'un coup de main pour savoir comment choisir mes fluorochromes et mes anticorps, mais pas en terme de spectres d'excitation et d'émission.  [...] Pour le reste il n'y a pas vraiment de solution miracle. C'est mise au point, mise au point, mise au point. A commencer par chacun des anticorps séparément pour optimiser les conditions.  [...]

Sélectivité de molécules originales | Dossier

C'est pourquoi les recherches actuelles visent à synthétiser des molécules ayant un fort potentiel d'inhibition de la [cyclooxygénase ]-2, dans le but de lutter contre les processus liés à l'inflammation, sans influer sur l'activité de la [cyclooxygénase ]-1 et donc de préserver ses propriétés de cytoprotection.  [...] Après avoir présenté les [cyclooxygénases ] et leur rôle dans les processus inflammatoires et de cytoprotections, nous verrons comment la mise au point du modèle a été réalisé, notamment le choix du type cellulaire, les conditions (concentration et temps d'incubation) d'utilisation des différents activateurs et la validation de ce modèle avec des molécules de référence.  [...]

Que reste t-il encore à découvrir en biologie? - Page 2

- les applications de ces connaissances pour la mise au point de nouvelles thérapies (mais là, on sort du champs de la biologie pure...).  [...] Oui, c'est cela même. Quand je parlais de biologie pure, c'est celle qui est fondamentale, qui ne cherche qu'à comprendre et expliquer les phénomènes de la vie. Il faut voir si à l'oral ton professeur s'intéresse aussi aux applications de la biologie, auquel cas tu ouvres tout un champ de choses à découvrir, notamment dans les domaines des thérapies géniques et cellulaires, de la modélisation de maladie in vitro par les cellules iPS, des immunothérapies et immunotechnologies.  [...]

Mélanome de l'oeil : le détecter plus tôt grâce à l'ADN tumoral du sang

Mais à ce jour, les techniques d'imagerie et de biologie ne peuvent révéler que des métastases ayant déjà une taille importante. D'où l'idée des chercheurs de l'Institut Curie de détecter de l'ADN tumoral circulant dans le sang des patients.  [...] 000 génomes entiers de cellule. Cette technique est simple, peu coûteuse et peut être mise en oeuvre dans n'importe quel laboratoire de biologie moléculaire clinique.  [...]

Biographie | Myriam Cohen - Docteur en pharmacie | Futura Santé

Loin d'être une pratique superficielle, l'usage des cosmétiques montre, dans ses variations mêmes, qu'il est une part intégrante de notre quotidien. À l'origine d'un produit cosmétique, il y a toujours la rencontre de plusieurs réflexions. les velléités du marketing, une trouvaille du centre de recherche qui vient de dénicher une molécule anti âge particulière par exemple, et l'analyse de fond des besoins du marché.  [...] Physiologie, biologie cutanée, mise au point de nouveaux actifs et ingrédients, chimie fine, étude et développement de nouvelles textures... la cosmétologie est une science pluridisciplinaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cytométrie en flux : discrimination, compensation, contrôle isotypique

Lors des réglages pré-analytiques, je n'ai que des graphiques en nuage de point séparé en 4 parties par une ligne verticale et une horizontale, j'avais compris que c'était pour soustraire la fluorescence venant d'autres fluorochrome, donc la compensation, et j'ai bien vu d'où on partait sur le net mais concrêtement on a fait quoi.  [...] Avec mon maitre de stage on a donc décidé de porter le sujet sur la mise au point du protocole opératoire (autant dire que mon mémoire est passé de lisible à biologiquement inintéressant), ce qui n'a rien de mécanique mais porte beaucoup plus sur les conditions expérimentales que sur les rares résultats.  [...]