• Santé - Biologie moléculaire, Extraction, Digestion

[Biologie Moléculaire] extraction à la guanidine/ digestion à la papaïne

[Biologie Moléculaire] extraction à la guanidine/ digestion à la papaïne.  [...] Je travaille sur une proteine des pili bactériens en utilisant pour isoler cette protéine (sous-unité pilE du pilus) 2 méthodes. l'extraction à la guanidine (détergent) et la digestion à la papaïne (enzyme protéolytique). Est-ce que quelqu'un saurait quelles autres applications il y aurait pour ces 2 méthodes ou autrement quelle est leur action, au niveau moléculaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ADN et digestion enzymatique

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ADN et digestion enzymatique.  [...] Je suis actuellement en train de rédiger mon compte rendu de TP concernant une extraction d'ADN et une digestion enzymatique par 3 enzymes (EcoRI, BamHI et HindIII), en faisant le TP, notre professeur ne nous a pas vraiment expliqué, je dirais même qu'il n'a donner aucune information.  [...]

[Biologie Moléculaire] Où puuis-je trouver la carte de restriction d'un plamide?

[Biologie Moléculaire] Où puuis-je trouver la carte de restriction d'un plamide.  [...] j'ai fait un TP de biologie moléculaire avec le plamide pUC18 et une question porte sur l'etablissement de la carte de restriction du plasmide a partir de digestion enzymatique faite sur celui ci.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR : migration après amplification (sans digestion enzymatique)

[Biologie Moléculaire] PCR. migration après amplification (sans digestion enzymatique).  [...] Là je ne suis pas sure de moi du tout. est-ce que pour la colonie bleue il n'y a pas de produit d'amplification et pour la colo blanche il y en a un de 240 pb Je trouve ça illogique car la PCR amplifie l'ADN, or la colonie bleue même sans insert contient bien un plasmide donc de l'ADN.   [...]

enzymes de restriction

d'accord merci. http.//biologie.univ-mrs.fr/upload/p...diantfinal.pdf (page 2 le mode d'action des enzymes de restriction) les enzymes générant des bouts collants vont a chaque fois couper après un G ou ça dépend et ceci est seulement un exemple qu'est ce qui confère a l'enzyme sa faculté a généré soit des bouts collant 5' soit 3'.  [...] A noter que dans des applications de biologie moléculaire du gène impliquant les techniques courantes du génie génétique, la spécificité de coupure (on parle alors de fidélité de l'enzyme) peut être artificiellement altérée par les conditions dans lesquelles la digestion d'ADN s'effectue par chaque enzyme de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] problemes de digestion de plasmides

[Biologie Moléculaire] problemes de digestion de plasmides.  [...] j'utilise un plasmide pET 28a pour faire un clonage chez coli mais les différente digestion de ce ce plasmide par EcoR1 Hind3 Xba1 Kpn1 incuber plus ou moins longtemps ne me permette pas d obtenir une digestion correcte. quelqu un a déjà eu ce genre de résultats comment y palier comment l'interpréter.  [...]

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

je comprends pas concrètement ce qu'est le marqueur de poids moléculaire j'ai cherché sur internet mais les définitions ne sont pas claires.  [...] Tu digères ton ADN de phage, tu te retrouves donc avec plusieurs morceaux d'ADN de différentes tailles que tu sépares sur un gel d'agarose pour voir leurs tailles (en comparant avec le marqueur de poids moléculaire qui sert d'étalon) et savoir combien de sites de restriction il y a dans ton ADN de phage.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème après digestion/Klenow/dénaturation

Savez-vous pourquoi Je pense donc purifier directement mon vecteur sur colonne sans dénaturer la Klenow, mais je veux faire ensuite une autre digestion, pensez-vous qu'il puisse rester de la Klenow associée à mon ADN et qui pourrait donc interférer avec la suite de ma manip.  [...] Oui j'ai pas fait la dénaturation de la Klenow du coup, j'ai purifié direct sur colonne, et ensuite j'ai fait ma 2e digestion et purifié sur gel. On verra bien si ma ligation fonctionne comme il faut.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction sur plasmides- Digestion complète et incomplète

La digestion incomplète est une digestion qui n'est pas efficace sur l'ensemble des molécules du substrat. Exemple. la moitié des plasmides sont digérés, l'autre moitié est intécte. Elle se produit quand l'enzyme n'est pas bien dosée, qu'elle n'est pas très active, que la température ou le tampon ne sont pas bien ajustés,  [...] .. bref, pour tout un tas de raisons. Et comme on ne maitrise jamais parfaitement chacun de ces paramètres, on ne peut pas non plus prévoir si la réaction sera complète ou non. Surtout si plusieurs enzymes différentes sont utilisées pour chacun des sites. Après, si on fait un électrophorèse, on peut quantifier l'avancement de la digestion pour chacun des sites, car en général, les différents fragements n'ont pas la même taille.  [...]

[Biologie Moléculaire] primer with (too!!!) long tail?

Donc ma question est la suivante, est-ce possible ou alors que dois-je faire, je me m'imagine pas faire une PCR et un sub-clonage de 38bp. Peut être utiliser des primers qui overlap mais est ce que je peux toujours amplifier ma séquence sur mon gène d'intérêt.   [...] Il faut encore que je valide par séquençage. Je dois avouer aussi que dans mon cas c'est assez simple vu que dans les 30nt que j'avais à insérer il y a un site de restriction, j'ai donc pu valider mes constructions en digérant par cette enzyme.   [...]