• Santé - Bandes, Quantité, ADN

[Biologie Moléculaire] gel ADN stress

ces ADN sont extraient de feuilles auxquelles j'ai appliqué un stress à différents niveaux. j'ai obtenu des bandes au même niveau. c à d de même taille. mais la quantité diffère.  [...] NB (et à garder en tête). quand on fait une PCR classique, l'intensité des bandes reflètent en général la quantité d'ADN amplifié mais ce n'est pas strictement vrai et il ne faut pas conclure qu'on a plus ou moins d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] détection de gènes multicopies

Tout d'abord j'avais penser faire une digestion de mon adn, puis faire migrer, suivi d'une hybridation avec une sonde radioactive et j'aurais alors pu voir si une ou plusieurs bandes s'allumaient. Malheureusement cette technique nécessite une grande quantité d'adn que je n'ai pas.  [...] en PCRq c'est possible, la difficulté étant de savoir a quelle quantité de référence se rapporter. Par contre en FISH je vois pas comment on peut faire.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et témoin négatif

une autre question, comment faire pr estimer la taille des bandes sachant que l'on dépose 7µL de produits PCR mais que la ladder correspond a 500ng d'ADN.  [...] Concernant la quantité relative. En général pour les ladders commerciaux, on peut connaitre la quantité d'ADN pour une ou plusieurs bandes du marqueurs de taille. Apres il faut comparer l'intensité du produit de PCR avec l'intensité des bandes du marqueurs de taille.  [...]

[Biotechnologie] Principe de la PCR

quantité analysable d'ADN (environ 0,1 microgramme). Chaque cycle voit théoriquement doubler la quantité d'ADN présente au cours du cycle.  [...] la réaction d'amplification peut se réduire à une copie unique. La quantité maximale ne peut en aucun cas excéder 2 ¼g. En général, les quantités utilisées se situent dans une gamme comprise entre 10 et 500 ng d'ADN matriciel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème lors de la transformation avec DH5a E.coli.

Après extraction de mes bandes d'ADN obtenu sur gel, j'ai réalisée une purification avec le kit nucléoSpin Extract II de Macherey Nagel. Ensuite j'ai vérifiée sur gel que je n'avais pas perdu trop en quantité d'ADN pour la ligation. J'ai donc effectué la ligation sur vecteur de clonage pGEMT-easy de Promega en laissant une nuit à 4°C puis T°ambiante.  [...] J'ai travaillé sur E.coli DH5a, et je me souviens que si par miracle elle poussait après ligation+transformation, après une amplification, j'avais de très faible quantité d'ADN. Donc la bactérie est peut être aussi pourrite pour ce genre de chose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

J'ai tout vérifié avant ligation. Tout a ete purifie et reverifie sur gel. Le vecteur se ligue sur lui meme avant dephosphorylation et pas apres, donc en theorie les extremites sont ok. Idem pour l'insert qui semble etre ok aussi (des personnes de mon labo m'ont dit que le smear etait normal quand on ligue un produit des produits de pcr seuls).   [...] Sinon les problemes liées à l'extraction des bandes des gels sont la conséquence d'un mauvais rendement d'extraction J'utilise le kit de promega et personnellement je n'ai jamais eut de probleme, mais comme piwi j'essaye au possible de ne pas passer par la, a cause de la quantité d'ADN perdue.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Le 1er gel est tout à fait normal, tes ladders sont propres, pour les bandes incurvées c'est pas super flagrant et surement lié à la quantité d'ADN.  [...] Il m'est arrivé d'avoir des bandes moches comme ça lorsque je m'étais planté de bleu de dépôt, j'avais utilisé du bleu de dépot de protéines (avec bétamercapto) pour migrer de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

Ceci dit la quantité de plasmide ne me semble pas etre la cause du soucis, vu que les trois premieres pistes ne contiennent que de l'ADNg si j'ai bien compris. Et la bande d'amplification est tres forte aussi.  [...] Effectivement j'ai négligé l'ADN génomique. Donc non c'est pas la quantité de plasmide. Cependant je maintiens que ça n'est pas deux bandes mais un dédoublement d'une seule bande du fait de la masse d'ADN que vous avez produit. Ca arrive, c'est rien.  [...]

[Biologie Moléculaire] PFGE : électrophorèse en champ pulsé : Plugs

en fait les plugs sont les échantillons préparés, pris en masse dans de la gélose et moulés avant d'être soumis à l'éléctrophorèse par champ pulsé. C'est un terme employé dans les protocoles de PFGE.   [...] je veux demandé une autre chose,restons dans PFGE, quant la photo sera prise et les bandes sont bien claires comment je peux interpretè les bandes.. (c pour mon memoire au fait),comment je décrit la migration des defferents fragments d'ADN des defferents souches.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème transfo...

En fait, je n'ai jamais pensé à faire de simples digestions peut-être parce que jusque là je n'ai fait que des clonages simples = sans soucis et particularités... Ceci dit, vu la tête de ces digestions, je doute fort qu'une PCR soit utile. il n'y a pas mon plasmide dedans, déjà quand je pense aux intensités des bandes (celle à 2,5 kb est systématiquement beaucoup plus intense que celle à 5-6 kb, donc j'ai une quantité beaucoup plus grande de cet ADN, alors que je m'attendais quand même à des bandes d'intensités très similaires puisque je suis en équimolaire).  [...] Tu est bien équimolaire entre le plasmide et ton insert. Cependant l'intensité de la bande est fonction du nombre de nucléotide (BET, agent intercalent, plus y a de bases plus y a de BET) qui la compose, donc non pas de la molarité mais de la quantité de nucléotide dans la bande.  [...]