• Santé - Bandes, Puits, ADN

[Biologie Moléculaire] problème de PCR!!!?

J'ai fait une PCR et sur le gel d'agarose les bandes des amorces sont trés intenses alors que seulement une bande qui correspond au pdt PCR d'un seul echantillon parmi 15 apparait.  [...] Dans les 15 Soit ton ADN est dégradé dans 14 puits, soit tu as mal fait ton dépot, soit ton mix est mal fait. trop d'amorces par exemple si tu as vraiment des bandes intenses pour les amorces.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorese gel d'agarose

C'est pourquoi dans un des puits on verse une solution de marqueur de taille. C'est un cocktail de plusieurs ADN dont on connait la taille.  [...] Après migration tu observe une ou plusieurs bandes, tu compare la distance puits/bande à celle de ton ADN à celui du marqueur et tu peu déterminer sa taille.  [...]

[Biologie Moléculaire] Révélation des extraits d'ADN

je crois que je me suis trop précipitée avant de me poser des questions, les bandes bleues ont finalement révélées une fluorescence bien nette pour les premiers puits qui correspondaient à des ADN extraits avec un kit tout prêt.  [...] par contre la seconde série de puits correspondait à des ADN extraits à l'ancienne avec toute l'armada de solutions que j'avais eu tant de mal à préparer.  [...]

problème d'analyse de gel de migration

j'expose mon probleme. apres une rt pcr, je fais migrer mes adn. un couple d'amorce par puits, donc normalement un seul trait visible sur le gel si la rt pcr a marché ou alors rien... mais là, j'obtiens plusieur bandes distinctes pour el meme puit. les amorces ne pouvant s'hybrider qu'a un seul endroit sur le genome, je ne comprend pas comment on peut obtenir plusieurs produits pcr avec un seul couple d'amorce.  [...] comment jouerai la temperature si c'etait sur l'appariement des deux amorces. dans ce cas on aurai pas d'amplification et donc pas de bandes, et encore moins de bandes multiples.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN et contaminants

En fait ce sont des grosses bandes près des puits. il y a une migration de quelques mm sur gel d'agarose 1%.  [...] donc à priori ces grosses bandes près des puits seraient de l'ADN Sinon j'ai un doute mais lorsque l'on mesure la DO à 260, on détecte ADN et ARN en même temps donc même en ayant un bon rapport (près de 1.8) ça ne signifie pas qu'il n'y pas de contaminant ADN Ce rapport permet de dire juste s'il y a ou non des protéines. C'est bien ça merci.  [...]

[Microbiologie] extraction d'ADN

s'il vous plaît mon encadreur m'a demandé de faire migrer les protéines SDS PAGE en puits confondus je ne sais même pas de quoi il s'agit je n'ai pas osé lui poser la question comment faire.  [...] et pr la SDS page c est une electrophorese qui fait denaturer tn adn. c est un long mecanisme mais facile a appliquer, l essetiel c est qur tn adn denaturé va migrer et pour la revelation t utulise le.bleu de comassie, et dans un des puits tu dois aussi mettre des marqueurs de taille finilamnt t recupere tn gel et tu verifie tes bandes. j espere que je ne me trompe pas.  [...]

[Génétique] Analyse plasmides recombinants/non recombinants

Pour les puits 2 et 3 j'observe plusieurs bandes mais je l'ai justifié en disant que le plasmide était sous plusieurs formes (relâché, superenroulé…).  [...] Le probleme c'est que pour le puits 6 je ne sais pas quoi déduire... Pourquoi y a t il 2 bandes La bande a 3000 correspondrait à un excès de plasmides non recombinants et la bande a 6000 mon plasmide contenant l'insert Le soucis c'est que quand j'ai lysé les bactéries, je n'en n'ai vu aucune de bleue dans le culot contrairement à l'échantillon A.  [...]

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse

D'après le peu que j'ai compris à partir de ses explications, il faut utiliser l'intensité de fluorescence de la bande dans les puits 1 et 3, et la comparer à l'intensité des bandes du puits 2 (marqueur PM).  [...] On peut alors dire combien il y a d'ADN dans la bande du puits 1 ou 3 de même intensité, et sachant quel volume on a déposé dans le puits, on peut alors savoir quelle concentration on avait dans le tube, et donc la quantité d'ADN qu'on avait à la sortie de la PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

PS. Si tu avais posé ces questions dans la discussion que tu avais déjà créé pour l'occasion (révélation extraits ADN) ça aurait été mieux puisque les deux discussions traite la même expérience. Ainsi les réponses aurait eu plus de chance d'être complètes et pertinentes. Tu le sauras pour la prochaine fois.  [...] Mon conseil, fait un gel 0,8 % agarose, grands puits, mets 10 uL d'ADN et laisse bien migrer. Révèlé au BET et si il y a bande aux UV, cela veut dire qu'il y a ADN (ou ARN même si bon...j'ai déjà expliqué.). Si tu ne vois rien, il n'y a pas d'ADN, si il y a un smear, il y a des ADN mais tout dégradés.  [...]

[Biologie Moléculaire] élèctrophorèse (ADN)

Donc, si tu n'observes pas de bande dans un puits c'est que le poids moléculaire de l'ADN fragmenté n'est pas dans la fourchette de taille observable par le gel d'agarose calibré (autrement dit, ton ADN est tellement petit qu'il a pu passer a travers ce maille et que lors de la migration, il a carrément quitter le gel en migrant vers une électrode).  [...] Par contre, j'ai du mal m'exprimer, ce que je n'arrive pas à expliquer c'est pourquoi à T0 on voit une migration avec nottament une barre près du puits, à T1 la migration est de même longueur sauf que la barre près du puits apparait moins nettement, et à T2 la migration est bien visible aussi mais il n'y a plus de barre tout près du puits.  [...]