• Santé - Bandes, Protéines, ADN

[Génétique] Retard sur gel

mais l'on voie 2 bandes car. la plus petite bande il n'y a qu'un site fixé par la protéine, la plus grande bande car il ya les 2 protéines fixés.  [...] de méme pour le 2 éme complexe, si la bande à un poids moléculaires plus élevé, est ce que c'est car le complexe protéique B est plus lourd ou bien que sur cette bande il ya aussi le complexe protéique A attaché.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN et contaminants

donc à priori ces grosses bandes près des puits seraient de l'ADN Sinon j'ai un doute mais lorsque l'on mesure la DO à 260, on détecte ADN et ARN en même temps donc même en ayant un bon rapport (près de 1.8) ça ne signifie pas qu'il n'y pas de contaminant ADN Ce rapport permet de dire juste s'il y a ou non des protéines. C'est bien ça merci.  [...] Oui c'est ca. Le rapport 260/280 te permet de voir si tu as des contaminants (protéine, phénol), et si ton culot est bien redisssous.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Personnellement ce genre de bandes me fait plus penser à des problèmes de concentration ou alors a des impuretés dans le gel. Tu as essayé avec une autre poudre d'agarose pour voir si ça faisait pareil.  [...] Il m'est arrivé d'avoir des bandes moches comme ça lorsque je m'étais planté de bleu de dépôt, j'avais utilisé du bleu de dépot de protéines (avec bétamercapto) pour migrer de l'ADN.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

Exemple d'applications ben comme dans le sujet que j'ai mis en lien ^^ (pour détecter des protéines ubiquitines, c'est à dire des protéines qui marquent les protéines à éliminer, éliminés par les protéasomes situés dans les noyaux et cytosoles des cellules d'ailleurs).  [...] Donc si j'ai bien compris, les protéines en B sont plus ubiquitinés que les protéines en A par exemple, car les tâches sopnt certes un peu moins intenses (qualité vraiment pourri) mais nous avons plus de bandes, donc l'invalidation de USP1 se fait plus ressentir en B qu'en A.  [...]

Electrophorèse acétate de cellulose

En l'occurrence justement, quel serait le sens de migration des protéines à un pH de 8 (pH du TAE), sont-elles chargées positivement ou négativement (je suppose que cela peut varier en fonction des protéines).  [...] Du coup, la migration se ferait à la fois selon la taille et la charge des protéines Ou, si l'on considère que leur charge est la même, uniquement en fonction de leur taille.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et témoin négatif

une autre question, comment faire pr estimer la taille des bandes sachant que l'on dépose 7µL de produits PCR mais que la ladder correspond a 500ng d'ADN.  [...] Concernant la quantité relative. En général pour les ladders commerciaux, on peut connaitre la quantité d'ADN pour une ou plusieurs bandes du marqueurs de taille. Apres il faut comparer l'intensité du produit de PCR avec l'intensité des bandes du marqueurs de taille.  [...]

Sequence 5' pour un ADNc en Southern Blot

En ce qui concerne tes problèmes pour l'extrémité 5' cela me parraît un peu moins clair, mais sur ton ARN il existe une partie 5' UTR (untranslating region) qui sort de la region codante mais qui est quand même transcrite.   [...] salut, je ne suis pas sure mais le probleme me parrait beaucoup plus simple que ca. quoique c'est pas trés clair..quand tu dit une sonde 5'.qui s'hybride avec l'extrémité 5' de l'adn c ou g...ou bien tu parle de sonde marqué à son extrémité 5'...parceque si c'est le cas ca change tout.  [...]

RT-PCR et PAGE en conditions dénaturantes???

C'est sutout vrai pour la migration d'ADN circulaire, type ADN bactérien, mitochondrial ou encore plasmide. On obtient souvent 2 bandes correspondants à une forme enroulées qui va se faufiller dans le gel, et une bande de plus haut PM apparent. Je ne me rapelle pas avoir utiliser de l'urée pour un northern ou un southern blot.  [...] on travaille en conditions dénaturantes pour éviter que les structures secondaires (ADn ou prot)n'interfèrent dans la migration ou qu'on ait deux bandes au lieu d'une.  [...]

[Biochimie] Paramètres western blot

Je migre generalement jusqu'a ce que mon bleu sorte du gel (~ 1h) et mes bandes a haut PM sont super bien separee. Je sais que la meme compagnie vend aussi des gels specifiques pour les grosses proteines.  [...] Mais si tu n'as que ces deux protéines à regarder, n'hésites pas à faire sortir des bandes de l'ordre de 100 kDa, tes deux formes seront d'autant mieux séparées.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Le front de migration n'est pas net (plus une sorte de flou bleu qu'une bande), et les protéines ne se séparent pas bien. En Coomassie le bas du gel ne présent pas de belles bandes discrètes. Pourtant le marqueur lui migre très bien.  [...] Et si on regarde bien la photo du gel on voit une sorte de front (trait bleu) avant la fin du gel, là ou s'arrête les protéines sous forme de bandes discrètes.  [...]