• Santé - Bandes, Poids, éléve

[Biologie Moléculaire] Problème bande inconnue PCR

Je dirai même plusieurs formes minoritaires, car pour moi tu as plusieurs bandes (je dirais 3 vue la photo), d'intensité d'autant plus faible que le poids moléculaire est élevé.  [...] Concernant ces bandes de poids moléculaire élevé correspondant pas à l'amplicon, je pensais à une hybridation aspécifique, car les amorces 518r et 338f sont spécifique d'une séquenc de l'ARNr 16s qui est présentent chez toutes les bactéries, mais peut-être qu'une autre séquence présente des analogie avec cette séquence, et cela expliquerais la faible intensité (car séquence moins spécifique de celle ciblé).  [...]

Lecture graphique éléctrophorèse

Les numéros de bande de 0 à 30 je crois, et les flèches leur masse moléculaire en kDa. Je pense que c'est pour délimiter les bandes en fonction de leur poids moléculaire.  [...] C'est sur que si dit comme ça ça semble plus simple Mais est ce qu'on ne peut pas dire qu'il y ai plus de proteine à gauche qu'à droite, étant donné qu'à gauche de 43 la courbe est bien plus élevé Pour moi plus la courbe est élevé plus la radioactivité est importante, donc plus les proteines existantes s'expriment, donc logiquement les proteines sont plus nombreuses dans les bandes de gauche que de droite je ne sais pas si j'arrive à bien exprimer ma pensée, mais en résumé à droite peu de radioactivité = peu d'expression = proteine moins nombreuses, non.  [...]

Le gel natif

j'ai réalisé un western blot, où ma protéine en monomère devait être aux alentours de 35 KDa, mais au fait j'ai eu d'autres bandes qui sont à peu près au double et triple du poids présumé. du coup j'ai fait un gel natif pour voir sa conformation à l'état natif.  [...] premièrement, j'ai réalisé un SDS-Page puis transfert/révélation par l'anticorps anti-tag pour vérifier la taille du monomère, mais j'ai eu également des bandes qui sont presque au double et le triple de ce poids... donc il s'agit probablement de complexes.  [...]

lysat proteique

petite question du a une betise de ma part today. Je souhaiterai savoir si des lysats proteiques tiennent le choc a temperature ambiante. Aujourd hui j ai oublie toutes mes extractions proteique sur la paillasse ( y avait quand meme inhibiteur de protease) et donc je ne sais pas si mes echantillon seront bons pour un western.   [...] Si c'est juste verifier la presence d'une proteine et que le western donne une bande...pas de probleme, un premier blot donnera deja une indication.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème Western Blot

Après migration (celle-ci droite)et révélation avec un rouge ponceau, j'observe que mes bandes à faible poids moléculaire font des vagues ou smiley pas contents. Bref c'est moche.  [...] Si quelqu'un a déjà eu ce problème et peut me donner des explications plus avancé que changer toutes les sauces je suis preneur.   [...]

[Biologie Moléculaire] logiciel éléctrophorèse

existe-il un logiciel gratuit à télécharger pour le comptage des bandes sur les gels d'électrophorèse comme Soft Photocapt. il permet aussi le calcule du poids moléculaires.  [...]

Problème de séparation - Western blot

J'ai un problème assez bizarre. Lors de mon western blot, juste avant d'arrêter la migration, j'ai remarqué que mon marqueur de poids moléculaire ne s'était pas séparé et était resté entier, par contre il a bien migré jusqu'en bas du gel, de même pour les échantillons.  [...] Il faut savoir que j'ai poursuivi jusqu'à la révélation et j'ai obtenu des bandes blanches sur une membrane noire (l'inverse de ce qu'on devrait avoir en gros) et les bandes blanches étaient tout en bas de la membrane, rien ne s'est séparé en fonction du poids moléculaire et tout est au même endroit, je pense que la bande blanche est due à ça. signal trop fort car tout au même endroit.  [...]

pH d'une solution protéique et Western-blot

J'ai retenté en mettant de la soude 2N (Cf=0,1M) et là j'ai obtenu mes bandes attendues mais il semble que ma protéine se soit dégradée car j'ai aussi des bandes à un poids moléculaire plus faible.  [...] C'est ce qu'il fallait faire. Si vous avez des bandes supplémentaires, c'est soit que votre protéine n'est pas pure, soit qu'elle a été dégradée avant l'analyse sur gel.  [...]

[Biochimie] Sds page

Si la protéine est formé de 2 dimères différents (un hétérodimère) on aura 2 bandes différentes. Si bien sur leur poids est réellement différent.  [...] Donc si on fait un SDS PAGE avec le dimère, avec l'action de l'urée on n'aura qu'une seule bande (40 KDa par exemple) et avec l'action de l'urée et du mercaptoéthanol (qui coupe les protéines), on aura toujours une seule bande mais à poids moléculaire plus bas (style 20 Kda (20*2 = 40), puisque tu as un dimère, les 2 sous-unités ont bien le même poids et donc les chaines vont se retrouver au même niveau sur le gel et ne laisser qu'une bande.).  [...]

[Identification] Identification d'une protéine sérique

Sur un gel SDS-PAGE classique, une petite bande juste avant l'albumine représente la transthyretin (aussi nommée la pré-albumine). Poids moléculaire = 55 kDa.  [...] Si vous n'avez pas utilisé de marqueur de poids moléculaire peut être que la bande qui a migré le plus loin est tout simplement l'albumine et qu'il faut en fait chercher à quoi correspondent les bandes situées avant (Ig et ).  [...]