• Santé - Bandes, Fixation, Anticorps

résultats WB

j'ai réalisé un Western blot (pièce jointe) et les résultats sont bien ceux auxquels je m'attendais mais je voulais savoir à quoi correspondait les légères petites bandes qu'on peut apercevoir un peu partout est ce un fixation non spécifique de l'anticorps utilisé.  [...] L'anticorps va toujours réagir avec des protéines dont il n'a que peu d'affinité. Si la saturation ou le rinçage n'est pas suffisamment stringent, on garde des bandes non spécifiques (et si le rinçage est trop stringent, on risque de diminuer l'intensité du signal recherché).  [...]

examen de biologie moléculaire

pas de fixation entre sonde Op A avec Reg B/Reg A avec CFB, mais transcription ( mais sans fixation, je ne comprend ps pk il y a transcription).  [...] pas de fixation entre la sonde Op A avec Reg A, mais transcription ( idem, SANS fixation, comment il peut il y avoir la transcription.  [...]

[Microbiologie] western blotting

j'ai fait migrer mes protéines par sds page en puits confondus, sur le gel les bandes sont nettes, en faisant le transfert sur membrane de nitrocellulose et après révélation par le 4 chloro1 naphtol je n'ai pas obtenu des bandes pourquoi à votre avis sachant que le transfert s'est bien passé j'ai dilué les anticorps primaires 1/100 et les anticorps secondaires 1/2000 je doute par rapport au titre des anticorps que j'ai utilisé sachant qu'ils proviennent des patients atteints de Mycoplasma pneumoniae qu'est ce que je dois faire.  [...] Ensuite, si vous n'avez aucune idée du titre des anticorps, et de leur qualité, il va être difficile de faire autre chose que d'essayer d'autres dilutions. Les anticorps perox ne sont pas très stables (c'est l'enzyme qui se dégrade), vous pourriez utiliser un autre lot, neuf, ou tester ce secondaire avec un anticorps primaire dont vous être certain(e).  [...]

[Biologie Moléculaire] Mise en évidence d'interaction entre molécules

Cette étape permet aux PCEP de se fixer aux molécules (protéines ou acides nucléiques) avec lesquelles elles interagissent. Et on visualise enfin où se sont fixées les PCEP grâce à un anticorps anti-PCEP (±-Cpep sur la figure).  [...] Cette troisième colonne est un contrôle négatif et l'anticorps révèle uniquement les PCEP qui étaient déjà présentes dans le gel (et donc dans les fractions) avant l'incubation. Dans la deuxième colonne, on retrouve les mêmes bandes et en plus on observe d'autres bandes (entourées en rouge) correspondant aux molécules avec lesquelles ont interagi les PCEP.  [...]

Définition | Western blot - Immunoblot | Futura Santé

Image d'une membrane de western blot. Les bandes foncées correspondent aux protéines qui ont interagi avec les anticorps marqués utilisés. JWSchmidt, Wikimedia Commons, cc by sa 3.0.  [...] Les western blots sont largement utilisés dans les laboratoires de recherche qui s'intéressent aux rôles des protéines. Dans le domaine médical, elles sont utilisées dans le diagnostic de certaines maladies. Les tests VIH de confirmation utilisent cette technologie pour détecter un anticorps anti-VIH dans un échantillon de sérum.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Cependant, si tu arrives à transférer des bandes plus lourdes que ta protéine, ton problème ne vient probablement pas du transfert à moins que taprotéine ait une composition en acides aminés très atypique (c'est rare pour une protéine géante). Il faudrait donc être certain que la protéine que tu cherches est bien présente et que ton anticorps la reconnait efficacement dans les conditions ou tu l'utilises.  [...] Le dot blot marche donc c'est plutôt bon signe, même si ça n'exclue pas tous les artefacts possibles liés à ton anticorps. S'agit-il d'un anticorps polyclonal ou monoclonal directement dirigé contre ta protéine ou d'un anticorps dirigé contre une étiquette que tu as ajouté Quand tu utilises cet anticorps, tu ne vois pas ta protéine mais vois-tu d'autres bandes plus petites ailleurs sur le gel Si tu vois des bandes plus petites, s'agit-il d'une bande unique (dans ce cas, il s'agit probablement d'une reconnaissance non spécifique d'une protéine qui n'a rien à voir) ou de plusieurs bandes et en particulier de bandes proches les unes des autres (dans ce cas c'est sans doute une dégradation partielle).  [...]

[Immunologie] Westernblot

Nous avons séparé le gel en 2 parties, une coloré au bleu de Croomassie et l'autre pour le transfert. Après transfert (séparé en 5 bandes), nous avons utilisé le NHS-biotine (sans anticorps) sur une des bandes. Les 4 autres bandes ont servi pour une réaction immunoenzymatique.  [...] Je dois répondre à cette question. Quelle est l'utilité d'avoir utilisé le bleu pour le gel et la biotine pour la membrane Quelle est la différence entre le bleu de Coomassie et le NHS-biotine.   [...]

[Biochimie] Nickel et congélation ...

Tu as sans doute raison, parce que quand j'ai fait un western blot avec un anticorps anti-His, j'ai obtenu pusieurs bandes. Mais bon aucune n'égalait la patate de mon peptide.  [...] chargement de ton surnageant sur la colonne de Ni 2+ (équilibrée avant avec le même tampon que précédemment. d'ailleurs tu peux aussi ajouter de l'imidazole à 20 ou 30 mM pour augmenter la spécificité de fixation sur la colonne).  [...]

[Biologie Cellulaire] Dosage protéines dans du glycérol ?

Est-ce que tu as vraiment besoin de doser ton anticorps Si c'est pour faire un western, tu peux toujours faire une gamme avec plusieurs volumes d'anticorps pour avoir une idée de la quantité optimale. Ca ne va pas te donner la concentration mais tu pourras toujours faire des belles choses avec.  [...] sinon tu déposes un gamme d'anticoprs de concentration connu, et ton anticorps (a différentes concentration). tu fais une coloration au coomassie, et tu compares l'intensité des bandes au densitomètre.  [...]

[Biochimie] Denaturation des IgG avant western-blot

Je dois étudier une protéine produite par une souris, mais le seul anticorps disponible a été fait chez la souris, l'autre problème est que ma protéine fait environ 150 kd, et que je vois une jolie bande d'IgG a cette taille.  [...] Es-tu obligé de dénaturer à la chaleur Du SDS ou de l'urée 8M ne seraient-ils pas suffisants Les anticorps étant multimériques et attachés par des ponts disulfures, n'utilise pas d'agents réducteur sinon tu obtiendra plusieurs bandes bien différentes.  [...]