• Santé - Bandes, Blocage, Membrane

[Biochimie] bandes parasites aprés révélation western-blot

mon éluat final d'IP contient l'Ac que j'ai utilisé pour réaliser mon IP et bien sur ma protéine d'intérêt, je réalise ensuite un SDSpage et un western sur la nuit, je révèle mon blot à l'aide de l'Ac que j'ai utilisé pour mon IP ainsi qu'avec un Ac-HRP dirigé contre mon Ac d'IP, je bloque la membrane avec lait écrémé 3%.  [...] apré révélation du blot à l'opti 4CN (biorad) je retrouve bien ma protéine d'intérêt (IP fonctionne) ainsi que la bande haute et basse de mon Ac spécifique de ma protéine, mais si je laisse le blot révélé plus longtemps, je vois apparaitre d'autres bandes autour de celles de l'Ac (révélation du blot ~2min) ces bandes sont elles dû à un mauvais blocage de la membrane utilisation d'un Ac-HRP polyclonal comme Ac secondaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Aide Western Blot avec "taches" claires (marbrures de non marquage)

Le problème est surtout visible avec des blocages BSA et incub d'anticorps contre des prots phosphorylées, qui donnent des westerns avec plus de bruits de fond, d'où taches visibles.  [...] Je suis régulièrement obligé de déshybrider la membrane et refaire blocage/incub etc pour avoir les taches en dehors de mes bandes -pas au même endroit sur la même membrane- (ou pas du tout parfois). Donc le pb est pendant blocage/incub. Mais je ne trouve pas quoi malgré mes différents essais.  [...]

Définition | Western blot - Immunoblot | Futura Santé

Image d'une membrane de western blot. Les bandes foncées correspondent aux protéines qui ont interagi avec les anticorps marqués utilisés. JWSchmidt, Wikimedia Commons, cc by sa 3.0.  [...] blocage de la membrane. cette étape est indispensable pour limiter les interactions non spécifiques ultérieures entre les anticorps et la membrane. Le blocage est réalisé dans une solution de protéines concentrées.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique du Western Blot

Complément à mon message d'au dessus, je me rends compte qu'il est plus qu'incomplet. la membrane de nitrocellulose sur laquelle tu as transféré tes protéines est faite pour accrocher toutes les protéines de manière non spécifique, donc si tu incube tes anticorps sans avoir fait au préalable d'étape de blocage ils vont se fixer partout.  [...] Le blocage des sites de fixation non spécifique des anticorps aux protéines que tu as transféré sur la membrane peut aussi se faire si nécessaire mais c'est différent.  [...]

Le Botox déride et lutte contre le cancer ?

Ces applications thérapeutiques résultent du blocage par ces toxines de la fusion avec la membrane plasmique des vésicules de sécrétion dans les neurones qui sont leurs cibles naturelles.  [...] Dans les travaux publiés le 25 avril, Thierry Galli et ses collaborateurs montrent que la toxine tétanique, introduite dans des cellules épithéliales, inhibe leur capacité à se déplacer, en empêchant la fusion des vésicules de sécrétion avec la membrane plasmique.  [...]

[Microbiologie] western blotting

j'ai fait migrer mes protéines par sds page en puits confondus, sur le gel les bandes sont nettes, en faisant le transfert sur membrane de nitrocellulose et après révélation par le 4 chloro1 naphtol je n'ai pas obtenu des bandes pourquoi à votre avis sachant que le transfert s'est bien passé j'ai dilué les anticorps primaires 1/100 et les anticorps secondaires 1/2000 je doute par rapport au titre des anticorps que j'ai utilisé sachant qu'ils proviennent des patients atteints de Mycoplasma pneumoniae qu'est ce que je dois faire.  [...] Le rouge ponceau est aussi pratique pour vérifier qu'il y a bien des protéines sur la membrane, les étapes de blocages peuvent parfois etre problématiques. J'ai parfois observé qu'un blocage plus court améliorait les signaux.  [...]

[Physiologie] Courant rectifiant sortant/ entrant

Un changement de conformation du canal à partir d'un certain potentiel de membrane (Cf canaux K+ rectifiant entrant). La probalité d'ouverture de ces canaux est alors nul (ou quasi nul).  [...] Un blocage par un bouchon (exemple du recepteur ionotropique NMDA), Jusqu àun certain potentiel de membrane le canal est obstrué par un bouchon Mg2+. Quand la force electromotrice est suffisante l'ion Mg2+ est chassé et les ions peuvent donc passé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins - Page 2

Mon 2e problem. Jai strippé mes membranes après la 1ere revelation. Apres blocage de la membrane, jai incubé les ACs 1aire, 2aire etc. Mais à la revelation, plus rien. LES Memes ACs qui avaient marché à la premiere revelation ne donnent plus rien. J'ai un film vierge.  [...] Pour pAkt, il faut essayer différentes conditions de blocage, notamment BSA et lait, et aussi changer le milieu d'incubation de l'anticorps (lait ou BSA également).  [...]

[Biologie Cellulaire] Qui à déjà utilisé le système SNAP i.d. de Millipore pour ses Western Blot?

Une representante de millipore m'a présenté le système SNAP i.d. qui me permettrait de faire le blocage de la membrane, l'incubation avec l'anticorps primaire, les lavages et l'incubation avec l'anticorps secondaires de mes WB en une demi heure... Ce qui est très interessant etant donné que ça me ferait gagner une journée à chaque WB.  [...] Je viens de voir le problème du blocage à 0,5% en lait, c'est normal,j'ai eu le même problème,c'est trop ça bloque la cassette et donc l'aspiration ne peut pas se faire.La représentatante Millipore m'a expliqué qu'il fallait se mettre au max à 0,25% (et on peut décendre jusqu'à 0,05%).  [...]

[Biologie Cellulaire] Synchronisation G1/S par double blocage thymidine

Est ce que certains d'entre vous ont dèjà utilisé un protocole de double blocage avec une transfection entre les deux, sur les cellules Hela. blocage/transfection/re-blocage.  [...] J'ai déjà entendu parler du double blocage thymidine. Mais en considérant que dans une population cellulaire une grande proportion est en G1, pourquoi ne pas transfecter puis induire le blocage thymidine, sans étape de blocage avant transfection... Enfin je suppose que tu y as pensé mais c'est plus ou moins une question que je te pose.  [...]