• Santé - Bande, ADN, Plasmide

[Biochimie] Restriction bizarre

Combiend e site de coupe a le plasmide pour chaque enzime je pense a 2 pour BGIII au vu des résultas dans les pistes 2 et auncun pour PVUII (vu que le plasmide migre a la meme hauteur que le plasmide mon pote sans digestion) Cela voudrtait dire que les bandes dans les pistes 2 et 3 correspondent au plasmide linéarisé mais pourquoi n'ont -ils pas migré à la meme hauteur.  [...] Je dirais donc que dans le puits 1 il y a les formes superenroulée (bande du bas) et circulaire relâchée (bande du haut) du plasmide. Avec BgIII il y a 2 coupures vu qu'on observe deux morceaux d'ADN, et avec PvuII il n'y a qu'une coupure et on obtient la forme linéaire du plasmide.  [...]

extraction de gel

je dois faire une extraction d un plasmide qui a migre sur gel d agarose donc je dois faire une extraction sur gel est ce que auelau un peut il m expliquer le concept je dois utiliser le kit de biolabs de monarch.  [...] Le concept est tres simple dans ton tube ou tu récolte ton plasmide il peut y avoir plusieurs longueur d'ADN (ton plasmide avec insert, mais pourquoi pas ton plasmide vide, ou autre...) ducoup tu dois séléctionner uniquement ce qui t'interesse, tu les sépare donc par electrophorèse sur gel, et ensuite puisque tu visualise ou se trouve ton ADN sur ton gel, il suffit d'extraire (physiquement, avec une lame de rasoir par exemple)le petit carré ou se trouve la bande d'ADN qui t'interesse, ensuite le gel va etre fondu et purifié afin de retirer l'agarose et ne récupérer que l'ADN.  [...]

RT-PCR et PAGE en conditions dénaturantes???

Par southern blot en effet, maintenant quand tu fais migrer de l'ADN simple brin tu te mets en présence d'urée afin d'eviter les structures secondaires que l'ADN pourrait former.  [...] C'est sutout vrai pour la migration d'ADN circulaire, type ADN bactérien, mitochondrial ou encore plasmide. On obtient souvent 2 bandes correspondants à une forme enroulées qui va se faufiller dans le gel, et une bande de plus haut PM apparent. Je ne me rapelle pas avoir utiliser de l'urée pour un northern ou un southern blot.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

Effectivement j'ai négligé l'ADN génomique. Donc non c'est pas la quantité de plasmide. Cependant je maintiens que ça n'est pas deux bandes mais un dédoublement d'une seule bande du fait de la masse d'ADN que vous avez produit. Ca arrive, c'est rien.  [...] Là dessus il y a effectivement une petite remarque à faire. On voit que l'on a la même intensité de bande pour l'ADN produit à partir de l'ADNg et du plasmide. On peut penser ( ) qu'il y a pas mal de plasmide comme matrice pour les PCR. Du coup c'est vrai que l'on a du mal à imaginer que l'on ait mis autant d'ADNg.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR: dépôts qui restent dans les puits lors de la migration

Le problème que j'ai est que je ne parviens pas à obtenir de bande à découper sur mes gels (1% agarose dans TAE). mes dépots semblent rester dans les puits, quelque soit la condition considérée.  [...] Piste 3. Controle positif (50ng du plasmide contenant le gène wt). On y devine bien une bande au bon PM, mais celle-ci reste bien trop faible pour être purifiée (et le but est de purifier la bande pour l'ADN patient).  [...]

électrophorèse sur gel d'agarose

je suis en train de me dire que ça me parait logique que l'intensité de la bande reflète l'abondance... donc dans le cas de mon plasmide digéré, ça voudrait dire que j'ai plus de forme circulaire.  [...] Pour le BET c'est bien le cas, je suppose que c'est pareil pour les autres intercalants de l'ADN. Par contre cette relation marche t'elle que pour les fragments linéaires Une bande correspondant a un plasmide surenroulé ne devrait-elle pas être moins intense du au fait que certaines bases de l'ADN soit inaccessible du a la topologie de l'ADN ou alors est-ce négligeable.  [...]

interpretation electrophorese d'un plasmide purifié

Si il fait 5000bp alors le marqueur pourrait être un supercoiled ladder. mais c'est pas la question, si tu connais la taille du plasmide que tu as fait migrer et que tu ne connais pas le ladder utiliser la seule interprétation que tu peux faire de ce gel c'est sur la quantité d'ADN par puit.  [...] moi je vois qu'on a deux bandes une légère qui correspond a l'ADN génomique de la bactérie et la bande épaisse en dessous c'est notre plasmide circulaire purifié.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme purification sur gel d'agarose

Pour plus de precisions, je digere mon plasmide (50 microgrames) qui fais environ 10kb, afin d'exciser une bande a 300pb. Lorsque je fais migrer sur le gel, je vois parfaitement cette bande (qui doit logiquement contenir 1.2microgrammes d'ADN).  [...] Tout d'abord la quantite d'ADN dans ma bande est autour de 1 micrograme ce qui elimine toute possibilite de surcharge de la colone (dont la limite est 10 microg).  [...]

[Biologie Moléculaire] Sonde antisense pour ISH

J'ai tenté ces derniers jours de faire une sonde ARN. Après l'étape de linéarisation, mon plasmide avait la taille attendue (vérification du gel). J'ai donc lancé la reverse transcription. Après RT je devais obtenir une bande autour de 750bp évidemment je sais qu'avec le ladder ADN on ne peut pas vraiment comparer mais c'est beaucoup plus gros (presque 3kb) que ce qui a été obtenu dans le labo précédemment.  [...] Y a t-il une chance que ma sonde soit quand même correct Sinon à quoi pourrait correspondre ma bande sachant que le plasmide avec l'insert fait 5.5kb.  [...]

Expériences en génétique…

Les gènes de résistance aux antibiotiques, que possèdent les bactéries, sont situés sur ce qu'on apelle des plasmides. Un plasmide c'est de l'ADN circulaire (en général) qui ne fait pas partie du chromosome bactérien. Ce plasmide possède des gènes qui globalement sont considérés comme annexes par rapports aux gènes du chromosome bactérien.  [...] Sinon comme l'a dit Piwi au début de la discussion, tu peux aussi récupérer ce gène en coupant le plasmide (pour sortir le famaux gène de résistance) puis faire migrer le tout, récupérer le gène sur ton gel (en découpant la bande qui correspond au gène isolé sur ton gel) et enfin purifier l'ADN que tu as récupéré.  [...]