• Santé - Bactéries, Vecteur, ADN

Transfert horizontal gene

Les transferts de gènes sont déjà très utilisés en génie génétique. que ce soit transduction (un virus sert de vecteur entre deux bactéries), conjugaison (contact via des pili entre deux bactéries) mais surtout transformation (une bactérie prélève de l'ADN dans son milieu de vie).  [...] C'est simplement. transfert horizontal de gènes, donc je pensais parler de la syncitine avec un point de vue évolutif mais aussi de la bactérie Zobellia.  [...]

[Biochimie] banque d'ADN

comment fait on une banque d'ADN à partir de phage alors que ceux ci lysent la bactérie pourtant n'est ce pas les bactéries recombinantes qui forment la banque.  [...] Le phage lambda sert de vecteur. Ils portent l'ADN recombinant, vont infectés les bactéries hôtes et se multiplier. Cela permet de constituer une banque de phages clonés.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

En ce qui concerne l'efficacité de ta transformation (vecteur+insert) elle n'est que de 13.10^3 bactéries transformées/µg d'ADN ce qui est faible (une valeur de 10^6 est en général souhaitable).  [...] Je me pose encore une question. est-il possible que le vecteur sans insert rentre moins bien dans les bactéries que le vecteur avec insert Je pense que ça na aucune influence mais au cas où.  [...]

[Génétique] vecteur de plasmide

dans les vecteur de plasmide en peut cloner un ADN étrange par insertion dans un gène de résistance à un antibiotique la question est quelle est la méthode pour identifier les bactéries qui ont incorporés les plasmides recombinés ou le plasmides intacte.  [...] Dans ce cas pour différencier ces bactéries de celles qui ont le plasmide recombinant avec ton insert, on fait ce que l'on appelle le test blanc-bleu. Dans ton plasmide tu as un gène de résistance, un gène lacz avec son promoteur et d'autre partie encore.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

petit détail, la sélection des bactéries par l'ampicilline sert à savoir si la bactérie possède le plasmide, mais cela ne donne pas d'indication si le gène codant la protéine a bien été inséré dans ce vecteur.  [...] Ainsi, en ajoutant de l'ampicilline au milieu, seules celles avec un vecteur survivent. Vous sélectionnez les bactéries transformées, pas nécessairement celles qui contiennent votre fragment d'ADN d'intérêt.  [...]

ADN recombinant et plasmide

Lorsqu'on fait une expérience de clonage comme celle que tu vois sur la diapo, le plasmide n'est pas retiré d'une bactérie. C'est un vecteur que l'on a en stock dans nos labos (et que l'on achète à des sociétés qui les produisent souvent) et qui permet d'insérer le fragment d'ADN qui nous intéresse pour le multiplier en grande quantité dans des bactéries (généralement des Escherichia coli ).  [...] Par définition, les plasmides ne sont pas essentiels contrairement aux chromosomes. On peut les enlever des bactéries par curage par exemple et ça ne les empêche pas de vivre normalement. Ils apportent juste de nouvelles fonctions à l'organisme qui le possède comme des résistances aux antibiotiques, des facteurs de virulence.  [...]

[Microbiologie] transformation

je dois cloner les produits de digestion de la mutagenèse (insert ADN) dans le vecteur PGEX4T1 en transformant les bactéries compétentes DH5± J'ai trouvé des clones sur un milieu 2YT/AMP j'ai fait une miniprep pour extraire le plasmide recombinant simplement sur le gel les produits sont piégés dans le puits j'ai refait la manip à plusieurs reprises je trouve toujours le même résultat avec un smear Aidez moi que devrais je faire.  [...] Ton smear vient des bactéries je pense. Et ce que tu as dans tes puits c'est probablement ton plasmide avec l ADNg de tes bacteries.  [...]

[Biotechnologie] PCR Vs Mini-prep (faite vos paris...)

En faite on fabrique un vecteur recombinant avec 3 inserts de taille différente. On transforme des bactéries et on les cultives sur boite de petri et l'on regarde le phénotype (les fragments d'ADN s'insert dans LacZ' dans le vecteur pUC19). Ensuite on extrait les plasmides pour faire une PCR et on fait en même temps une mini-prep pour comparer les résultats.  [...] En faite après avoir fait la transformation des bactéries par les différents vecteurs recombinant on sélectionne une colonie de l'on récupère avec un cône de pipette que l'on plonge ensuite dans le milieu à PCR et ce même cône on le plonge après dans le milieu de culture pour la mini-prep.  [...]

Intégration dans un plasmide

C'est pour cette raison qu'on utilise un vecteur d'ADN circulaire pour introduire un gène dans une bactérie. Ce vecteur est souvent un plasmide modifié (avec de nombreux sites d'intégration possibles, un promoteur fort avant ces sites, des gènes de sélection pour pouvoir distinguer les bactéries qui ont intégré le plasmide...).  [...] Les bactériophages (utilisés en tant que vecteur) infectant les bactéries sont eux, par opposition, vraiment plus efficace. Mais dans ce cas ci, les objectifs de ta manipulation sont autres que le simple fait de vouloir faire exprimer un gène par une bactérie.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage en plasmides de grande taille via Sfi I (astuces)

ma ligation est optimisée (sur la nuit), rapport vecteur/insert 1.10. mes bactéries sont compétentes108B/µg ADN. après transformation, aucune colonie.  [...] Rapport vecteur.insert 1.10 ok mais tu utilises quelle quantité exactement d'ADN Et tu transformes avec quelle volume de ta ligation (pour quel volume de bactéries ).  [...]