• Santé - Bactéries, Protéine, Expression

Expression de protéines

J'ai fait une expression de protéine taguée Histidine contenue dans un vecteur d'expression pTrcHis2B (protéine de Plasmodium falciparum ) dans des bactéries d'expression Rosetta 2, seulement lors de l'extraction de cette protéine puis dépôt sur gel j'ai 2 tailles différentes de cette même protéine.  [...] Si tu es certain que les deux bandes correspondent à ta protéine (la mass spec est de loin la méthode la plus fiable, bien plus qu'un WB), tu as probablement eu une protéolyse spontanée. Il faudrait savoir si ta bande de plus haut poids correspond à la masse attendue pour ta protéine, auquel cas tu aurais de la protéine intacte en fraction soluble et de la protéine clivée en fraction insoluble.  [...]

surexpression d'une protéine dans E.coli

je suis en train d'essayer de surexprimer une protéine dans E.coli, et elle me pose beaucoup de problème. l'expression de la protéine en question est induite par l'addition d'IPTG dans le milieux de culture (milieux LB). et j'arive à la produire, le problème est que ma protéine qui devrait être soluble, je ne la retrouve plus dans les protéines solubles mais dans le culot après sonication des bactéries.  [...] Classique lors de la surexpression... la proteine s'aggrege et se retrouve insoluble. Comme précisé plus haut, tu peux essayer plusieurs temperatures d'induction, mais tu peux aussi essayer un temps d'induction moins long (3h suffisent en general), ou alors changer de souches de coli parfois ca change tout.  [...]

[Microbiologie] transformation bactérienne

On transforme avec un plasmide qui contient en général plusieurs gènes. Un gène de résistance pour sélectionner les bactéries transformantes, et un gène d'intérêt (pour l'expression d'une protéine par exemple).  [...] Rien ne nous empêche de transformer une cellule bactérienne avec plusieurs vecteurs, ou d'insérer sur un même vecteur plusieurs gènes d'intérêt. Mais votre question nécessite quelques pr écisions.  [...]

[Biochimie] Induction d'une protéine

La 1ère étape de la manipulation consiste à mettre au point les conditions de surexpression de cette proteine, pour cela on dispose d'une pr éculture de bactéries recombinantes permettant de produire l'adénine désaminase, je dois différentes conditions d'inductions ( Milieu LB / Milieu TB) ainsi que variation de la quantité d'IPTG, la DO d'induction est de 0,6.  [...] Je me demande aussi quels sont les facteurs qui peuvent faire varier l'expression de ma protéine le milieu de culture la température dans laquelle les bactéries vont évoluer la quantité d'IPTG peut être.  [...]

Vers un nouvel antibiotique qui pousse les bactéries au suicide ?

Ils se sont intéressés à un mécanisme particulier de suicide bactérien, induit en conditions de stress, un peu comme le font les cellules humaines par apoptose pour protéger le reste de l'organisme d'un possible cancer. Ce mécanisme, observé chez la majorité des bactéries, est régulé par un système toxine-antitoxine.  [...] Les chercheurs ont remarqué que l'induction de l'expression d'une protéine PezT légèrement mutée (tronquée des onze derniers acides aminés ), de façon à la rendre moins toxique, induit un défaut de division cellulaire menant au bout d'une heure à une mort massive des bactéries.  [...]

Bactérie et intentionalité

on peut très bien imaginer que deux bactéries au fonctionnement différent soient pr ésente, l'une va fixer l'une des molécules issue du macrophage grace a une protéine A, l'autre va capter les molécules issues du macrophage par une protéine B.  [...] cependant une cause entraînant une conséquence, la bactérie 1 avec la protéine A va mourir tandis que la bactérie 2 avec la protéine B va survivre, et donc faire proliférer cette version B qui entraine un mouvement opposé a celui entrainé par la protéine A, on va donc observer des bactéries qui semblent fuir, alors que c'est juste le produit de l'évolution par la sélection naturelle issu de multiples possibilité et qui reste visible après l'expression des conséquences des autres variants (en l'occurence la mort des autres variants).  [...]

[Biologie Moléculaire] activité des protéines recombinantes

Je me demande si les protéines recombinantes fusionnées à la GST peuvent être active dans les cellules. D'autre part, est-ce qu'il est possible de couper la fusion GST de ces protéines.  [...] 2) Oui, il suffit d'insérer un site de clivage entre la GST et la protéine d'intérêt. Il existe des vecteurs contenant déjà ce site de clivage en amont du MCS, par exemple le Pgex6P1 pour l'expression en bactéries.  [...]

[Biotechnologie] Biotechnologies....

Si je ne dis pas de bêtises, ça va des utilisations du génie génétique (empreintes ADN, OGM, tests génétiques...) en passant par des aspect plus biochimiques (production et extraction de composés d'intérêt par des bactéries, levures, plantes, etc...), mais aussi par la culture cellulaire, l'utilisation d'anticorps pour révéler la présence de pathogènes ou de composés donnés.  [...] D'ailleurs les modèles décrivant les actions collectives des bactéries (il peut y avoir des spécialisations au sein de groupes de bactéries, des stratégies collectives ou du parasitisme) peuvent être en fait très proches de ce qui est observé dans des groupes animaux (étudiés en éthologie).  [...]

Densité optique et croissance bactérienne

Bonjour, je suis stagiaire en biotechs et je me familiarise avec la culture bactérienne et le suivi de la croissance par la mesure de la densité optique, j'ai lu sur certains sites universitaires que la densité optique ne doit pas dépasser 0.5-0.6 car cela dépasse la linéarité de la croissance bactérienne et je ne serais plus dans la phase exponentielle, donc pour faire ma première mesure au temps zéro, je dois dois sortir mes bactéries assez tôt pour avoir un DO de 0.  [...] Mes bactéries sont transformées pour exprimer une certaine protéine, du coup on doit la cultiver avec de l'IPTG pour induire l'expression, je viens de finir mon bac, je n'ai pas encore beaucoup de connaissances, du coup les dilutions je ne vois pas vraiment à quoi cela sert réellement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de detection de ma protéine par immunofluorescence

voila j'ai transfecté mes cellules (HepaRG) avec un plasmide pcDNA3.1 Directional TOPO (Invitrogen) contenant mon insert d'intérêt (la protéase NS3 du virus de l'hépatite C). Ce plasmide contient aussi une tag V5, qui me permet (normalement ^^) de detecter ma protéine une fois exprimée dans mes cellules (grace à un anticorps anti-V5, Invitrogen).  [...] J'ai une question un peu bête mais as-tu vérifié que ta protéine de fusion NS3-V5 est bien exprimée dans tes cellules après transfection avec un simple SDS-PAGE Je n'ai jamais fait d'expression en cellules eucaryotes mais je suppose que c'est un peu comme pour les bactéries.  [...]