• Santé - Azote, Cellules, Décongélation

[Immunologie] Séparation des PBMCs

Au cours d'une séparation des cellules mono nuclées du sang, j'ai sur-estimé le nombre des lymphocytes.Les cellules ayant été mises au -80°C durant 72H,puis dans l'azote liquide, j'aimerais savoir si elles ne risquent pas de mourir au cours de la décongélation.  [...]

[Biologie Cellulaire] Effets de la congélation

lors d'un test sur des cellules de lignée NB4, nous avions avec mon groupe de TIPE comparer 4 cas avec les mêmes conditions de congélation et de décongélation en terme de vitesse, de gradient et de méthode de congélation (vapeur d'azote liquide à -80°C). On vérifiait après décongélation l'intégrité des cellules avec du bleu Trypan, un colorant qui normalement ne rentre pas dans la cellule.  [...] Le second avec un mélange 10% de DMSO 90% de SVF ainsi qu'une décongélation lente donnait 30% de cellules mortes. Avec le même mélange mais une décongélation rapide (et c'était le protocole classique de cette unité de l'INSERM), on avait 25% de pertes. La décongélation rapide est donc un avantage.  [...]

[Biologie Cellulaire] Utilisation du FACS

Ils nous ont aussi conseillé de fixer nos cellules soit en formol 2% soit en PAF 4% et de congeler azote liquide pour conserver. J'imagine bien évidemment qu'il faut rincer les cellules fixées avant de les congeler... La congélation est elle obligatoire, j'ai fait de l'immunoloc sur cellules et je n'ai jamais congelé j'ai toujours conservé mes préparation à 4°.  [...] Ma cinétique se déroulerait sur 40 jours et ça va être très difficile de le faire sur cellules fraiches. D'où la mise au point d'une methode de fixation/congélation la moins dénaturante possible. D'après ce que j'en sais la congélation à l'azote liquide devrait vitrifier l'eau ce qui n'endommage pas les cellules au moment de la décongélation mais c'est vrai que j'ai quand même quelques craintes.  [...]

[Biochimie] Congélation dans l’azote liquide puis conservation dans le congélateur -80c°

Ma question est la suivante. je dois laisser l'organisme dans l'azote liquide combien de temps au minimum Après l'avoir extrait de l'azote liquide, j'imagine que je dois le mettre immédiatement dans le congélateur réglé et mis en marche au préalable à -80 c°, mais au moment de l'analyse, quand j'extrais l'organisme du congélateur je dois attendre combien de temps pour la décongélation, et dans quelle température amiante doit s'effectuer la décongélation.  [...] quelques secondes suffisent pour congeler dans l'azote liquide. pour la decongelation mieux vaut tout mettre dans la glace.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dmso

J'ai eu l'occasion de comparer des taux de survies cellulaires avec des cellules placées dans différentes conditions et on observait 25% de mortalité cellulaire avec un protocole classique (10% de DMSO dans le milieu de culture, décongélation rapide à 37°C), 30% de mortalité avec 10% de DMSO et une décongélation lente à température ambiante (20°C environ) et 20% de mortalité avec un mélange à 1% de DMSO et une décongélation rapide à 37°C.  [...] Mais comme dit dans le fil, un peu plus haut, le DMSO est toxique pour la cellule. Alors toute la nuit (généralement 16h), même à 4°C, cela a très probablement augmenter la mortalité cellulaire. Et les cellules encore vivantes vont probablement être empoisonné par les débris cellulaire lors de la décongélation.  [...]

[Biologie Cellulaire] Au secours : Pb à la décongélation de cellules

La congélation a été faite par ma collègue mais il n'y a pas eu de souci. Elle fait toujours la même chose et toutes les autres cellules qu'elles décongèlent repartent sans problème.  [...] Ce sont uniquement les miennes qui ne repartent pas. Pourtant, j'ai suivi à la lettre le protocole de décongélation. décongélation rapide de l'ampoule à 37°C puis je mets les cellules dans 5ml de SVF pur, je centrifuge et je reprends dans du milieu RPMI (leur milieu de culture) et enfi je le mets à 37°C, 5% CO2.. Très peu avait adhéré le lendemain.  [...]

Décongélation et ensemencement 3T3

- à votre avis, vaut-il mieux que je change le milieu dès maintenant pour me débarrasser des cellules mortes ou j'attends demain pour ne pas les traumatiser dans leur croissance le lendemain de leur décongélation.  [...] Merci beaucoup, je vais suivre vos conseils (et rectifier mon protocole de décongélation.), il me reste beaucoup de cellules vivantes.  [...]

[Biologie Cellulaire] Contamination non identifiée

Ce genre d'aggrégat se produit lorsqu'il y a de la lyse cellulaire après décongélation, ce qui provoque l'aggrégation des cellules lysées. Lors de la décongélation de cellules, il n'est pas rare après avoir adhérer qu'elles aient des débris cellulaires collés à leur membrane.  [...] Il s'agit des cellules qui n'ont pas supporté la congélation/décongélation, qui se sont lysées puis collées sur les cellules adhérentes. Il est donc normal qu'après décongélation tu obtiennes dans ta culture des débris collés sur les cellules et des aggrégats.  [...]

[Biochimie] Conservation par azote liquide

Merci de votre réponse. Je vais travailler sur des reins complet en premier et dans le but de voir si la congélation n'affect pas les propriétés mechaniques du rein après un cycle de congélation/décongélation. C'est pas claire pour moi cette méthode à l'azote l'équide.  [...] Pour être plus claire, je souhaiterai mesurer le module d'élasticité du tissu rénal (rein de porc) avant et après congélation afin d'extraire les effets du cycle de congélation/décongélation. Dans mon cas je vais faire une congélation normal où je mets le rein dans un congélateur à -20°C par exemple et d'autre dans l'azote liquide à -196°C et voir le changement des propriétés mécaniques des reins en fonction de chaque méthode.  [...]

[Biochimie] Avatar - Le film

Un peu à la manière de quand on se jète d'un immeuble le plus dur n'est pas la chute mais l'atterrissage je crois que le plus dur n'est pas la congélation mais la décongélation durant laquelle les cellules éclates... Les avancées sont je pense nettement ralenties par l'éthique.  [...] La première, on arrive à préserver par congélation des cellules évidemment mais aussi des embryons. La difficulté n'est pas tellement de réussir à congeler et décongeler une cellule. Le fond du problème est que la congélation brute entraine la formation de cristaux de glace dans les cellules et ce sont ces cristaux de glace qui entraine la casse des cellules.  [...]