• Santé - ARNm, Cible, Dégradation

L'ARN interférence, une nouvelle voie thérapeutique

Cette technologie est basée sur l'inactivation spécifique d'un ARNm* par l'utilisation d'un petit ARN antisens (siARN) pouvant s'apparier avec l' ARNm. Cet appariement entre les deux molécules crée une région d'ARN double brin qui active le système de défense naturel de la cellule contre les virus (les virus présentent très fréquemment des ARN double brin).  [...] L'activation du système provoque l'inactivation de l'ARNm ciblé par le siARN en inhibant sa traduction ou en provoquant sa dégradation. Ainsi, l' extinction spécifique du gène permet de lutter contre les maladies causées par celui-ci.  [...]

[Biologie Moléculaire] miRNA (ou microARN) - Page 3

Ceci génère une molécule SIMPLE brin chargée sur le complexe RISC (RNA Induced Silencing Complex) qui va l'adresser sur son ARNm cible. Dès lors, soit le miARN s'apparie parfaitement et cela entraîne dégradation de l'ARNm, soit l'appariement est imparfait et cela entraîne inhibition de la traduction.  [...] 3- l'aspect cellulaire du processus. Les deux mécanismes impliquent un ciblage d'un ARNm dans des structures cytoplasmiques impliquées dans la dégradation et le stockage d'ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] siRNA résistant

Le but est surtout que le siRNA ne puisse plus induire la dégradation de son ARNm cible par l'absence de reconnaissance par RISC. Donc il y a juste à faire en sorte que la mutation du siRNA soit suffisante. Par contre, une fois la mutation choisie, je te conseille de blaster la séquence de ton siRNA mutant de façon à ne pas avoir des effets non spécifiques dûs à un ciblage d'un autre ARNm.  [...] Oui, moi j'avais compris la question comme ça, du coup ma réponse correspond à la mutation de la cible du siRNA, donc de l'ARNm ciblé, il faut trouver des mutations silencieuses qui font qu'il n'est plus sensible au siRNA mais conserve sa fonction une fois traduit.  [...]

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

En revanche, l'introduction d'ARN double brin de 38 à 1662 nucléotides dans des cellules de mammifères en culture déclenche une dégradation non spécifique de tous les ARNm cellulaires (Ui-Tei et al., FEBS Lett., 2000) aboutissant à la mort de la cellule.  [...] En normalisant l'activité GL2 en présence des dsRNA GL2, GL3 ou RL par rapport à son activité en présence du dsRNA hGFP, ils observent une spécificité de l'extinction, mais imprécise puisque dsRNA GL3 éteint GL2 avec la même efficacité que dsRNA GL2. Dans ce cas, la spécificité doit être vue comme une dégradation plus intense pour l'ARNm ciblé que pour l'ensemble des ARNm de la cellule.  [...]

ARN bicat?

Il existe de nombreux petits ARNs en épingle à cheveux transcrits(ils se replient sur eux même et deviennent bicaténaire). les siRNAS et les miRNAs (dont la fonction entre autre) est de réguler des gènes cibles soit en dégradant l'ARNm cible soit en bloquant la traduction.  [...] Dix pour cent des gènes souris seraient régulés par ces mécanismes. Ils participeraient également à la régulation de la transcription au niveau en agissant sur la chromatine. Ces découvertes sont relativement récentes et l'utilisation d'ARN double brins (RNA interférence) pour provoquer la dégradation d'ARNms cibles est actuellemnt largement utilisée, que ce soit en recherche fondamentale ou appliquée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification des ARNm procaryote ?

je sais que pour faire ce genre d'application il faut extraire les ARN totaux puis en purifier les ARNm apres passage sur une colonne d'oligo-dt qui va accrocher les ARNm grace a leur queue poly-A puis amplifier notre sequence cible en utilisant des primer specifiques.  [...] mais comment peut on dans ce cas la reperer notre ARNm cible vu qu'il sera en quantité tres reduite par rapport au ARNm totaux.  [...]

[Biologie Moléculaire] miRNA (ou microARN)

Après pour leurs fonctions, les siRNA vont induire une dégradation des ARNm, alors que les miRNA semblent plutôt bloquer leur traduction.  [...] Le rapport entre ARNi (par l'intermédiaire des siRNA) et miRNA, c'est le mécanisme d'action. clivage par l'enzyme DICER, insertion dans un complexe RISC et activation de celui ci, reconnaissance des ARNm complémentaires et dégradation.  [...]

Trangénèse > caroténoides > cossupression de gène ...

pour moi, la cosuppression d'un gène ou gene silencing est le fait d'éteindre l'expression d'un gène, c'est à dire d'entrainer l'arrêt de la production de la protéine qu'il code, en provoquant la destruction des ARNm de ce gène au fur et à mesure de leur production.  [...] En gros, si tu introduit par transgenèse une construction qui produit l'ARNm de ton gène-cible en grande quantité. Le système de régulation de l'expression du gène va détecter l'excès d'ARNm et détruire tous les ARNm de ce gène. Du coup, au lieu d'augmenter la quantité d'ARNm de ce gène et donc la quantité de protéines, on obtient l'effet inverse.  [...]

ARNs Interférants

Petite addition aux informations données au dessus, mais c'est un peu du pinaillage. l'inhibition de la traduction d'un ARNm par les miRNA peut effectivement passer par la destruction de l'ARNm cible, mais également par une simple inhibition de la traduction sans détruire physiquement l'ARNm, juste en le masquant.  [...] Dernièrement, concernant la couverture ou non de tout le génome. même si le nombre de miRNA est inférieur au nombre potentiel d'ARNm existants, il faut garder en tête qu'un miRNA particulier a en général plusieurs ARNm cibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Durée de vie d'un ARNm particulier

Tu connais l'orientation de ton TN10 parce que si c'est en antisens, y'a des chances pour que ton ARNm ne soit meme pas exprime. En effet le promoteur TN10 est fort, et souvent s'il se retrouve en antisens il va empecher l'elongation via le promoteur du gene cible.  [...] en fait chez la mito la polyadénylation est un signal qui cible vers la dégradation, et il me semble que c'est aussi le cas chez les bactéries. Après c'est vrai que j'ai aucune idée de la fréquence du phénomène chez les bactéries.  [...]