• Santé - ARN, Tampon, Extraits

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN - Différents Time points

Je dois faire des extractions d'ARN à différents time points espacés de quelques semaines. Le but étant de regarder l'évolution de l'expression d'un gène au cours du temps (RT-qPCR).  [...] Pas de soucis d'extraire tes ARN et de congeler ensuite au -80°C pour tes différents time points. J'éviterai même de les congeler dans le tampon de lyse.  [...]

[Biologie Moléculaire] qPCR sur espèces proches mais différentes

tu pourrais relativiser tes qPCR en utilisant l'ADN des mouches dont tu as extraits les RNA. Tu amplifies l'ADN du gène que tu cherches (2 copies par cellules) et tu exprimes la quantité d'ARN en % d'ADN.  [...] Idealement tu utilises les memes amplicons. en traitant les ARN extraits a la DNase avant la RT et en faisant un controles RT- tu t'assures de ne pas amplifier de contaminants ADN a la place de tes ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème avec gel d'acrylamide avec urée

L'expérience que je fais est la fixation d'ARN sur des billes de streptavidin-agarose. J'incube les billes avec des extraits nucléaires, je lave et j'élue les protéines avec un mélange d'acide acétique glacial 66% et 33mM MgCl2. Je précipite ensuite les protéines dans l'acétone (5 volumes) en présence de glycogène.  [...] En parralèle, je fais migrer des extraits nucléaires repris dans du tampon de dépot laemmli 2X. Le gel est un gel 10% Acryl/Bisacryl. Je l'ai coloré à l'argent avec le kit SilverQuest.  [...]

ARN en PCR

Afin d'effectuer une PCR sur un extraits d'ARN (et observer une amplification) il faut d'abord effectuer une Reverse-Transcription qui permet d'obtenir de l'ADNc (ADN complémentaire) à partir du brin d'ARN.  [...] Ça n'a absolument rien à voir avec la structure simple brin ou double brin. l'ARN peut tout à fait exister sous forme double-brin. La Taq Polymérase amplifie l'ADN parce parce qu'elle se lie à l'ADN pour produire de l'ADN. On parle d'ADN polymérase ADN dépendante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

Je fais de la RT-PCR sur des d'ARN extraits à partir de poumons. Je réalise une extraction au trizol puis sur colonne d'affinité pour purifier mes ARN. Pas de contaminations protéiques, et des ARN de qualité. je réalise ensuite une DNAse avant RT-PCR sur 250ng d'ARN.  [...] D'accord, je suis en train d'en relancer une d'autre échantillons, pour voir si ce problème ne vient pas de mon extraction, la RT est en train de tourner, je vais faire plusieurs contrôle négatif sur la PCR. pour verifier la qualité de mes ARN je fais simplement un gel d'agarose pour voir l'état des ARN ribosomaux.  [...]

quantification des ARN

Bonjour, esc-ce que quelqu'un pourrait m'aider J'ai extrait l'ARN total du sol et je voudrais le doser pour savoir ce que ça a donné (c'est la première fois que j'utilise ce kit, et je connais personne qui l'aurait déjà fait). Il paraît que lire l'absorbance n'est pas très fiable et j'ai peur de contaminer mes échantillons. Que me conseillez-vous.  [...] En fait j'utilse un kit, alors pour savoir ce qu'il y a dedans... C'est un tout nouveau, pour extraire l'ARN du sol. On l'avait pris pour essayer, sinon j'utiliserai un autre protocole après, mais je n'ai pas encore tout reçu.  [...]

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

Une piste inattendue va toutefois se dévoiler grâce à des travaux sur la drosophile. En travaillant sur des extraits d'embryons de drosophile, le groupe de Thomas Tuschl a pu constater que les ARN double brin sont clivés en de petits fragments d'ARN double brin de 21 à 23 nucléotides qui conduisent au clivage de l'ARNm cible à des intervalles de 21 à 23 nucléotides (Zamore et al.  [...] , Cell, 2000). Ils ont donc pensé que ces petits fragments d'ARN double brin sont responsables du clivage spécifique de l'ARNm cible. ce sont les petits ARN interférents (siRNA). Leur hypothèse fut confirmée sur des extraits d'embryons de drosophile où l'introduction de siRNA éteint l'expression du gène cible (Elbashir et al.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sélection ARNm spécifique puis RT-PCR

Je dispose au départ des ARN totaux extraits de cellules exprimant la protéine étudiée.  [...] oui c'est exactement ça... D'abord la RT qui transforme TOUT tes ARN en ADNc. Puis une PCR (ou qPCR) avec les amorces spécifique à ton gène d'interet...Faut juste être sûr de ces amorces, et pour ça faut séquencer puis blaster...le mieux est de le faire sur ADNg et ADNc (et tu compares.  [...]

Extraction enzymes

j'ai fait une extraction des enzymes à l'aide de tampon Tris-maléate contenant Triton X100,mais je ne sais pas à quelle température je peux conserver mes extraits.  [...] Je te suggère de les conserver à -20°C. Généralement on conserve les enzymes très concentrées en solution, à -20°C.   [...]

Beljanski - Page 2

A partir de la variété de bactérie Escherichia Coli K12 connue pour être non pathogène, Mirko Beljanski a trouvé une façon naturelle d'extraire ces fragments d'ARN (extrait ribonucléique d'ARN).  [...] 2. Lors d'une extraction d'ARN de E. coli, plus de 90% des ARN extrait sont des ARN ribosomiques. Donc en effet ces extraits sont probablement en tres grandes majorité des ARN ribosomiques.  [...]