• Santé - ARN, Sonde, Hybridation

hybridation in situ : préparation de sonde ARN

il y a quelque chose que je n'ai pas compris sur comment préparer une sonde ARN qui s'hybridera avec l'ARN complémentaire à détecter.  [...] Mais comme un seul des deux brins est transcrit lorsqu'on va vouloir faire la sonde ARN complémentaire on ne pourra que transcrire toujours le même brin, celui qui donne l'ARN de départ, donc on ne pourra jamais transcrire depuis l'autre brin pour avoir un ARN complémentaire.  [...]

Méthode PCR

1°) la méthode de séquençage direct de l'ARN utilise-t-elle une sonde d'hybridation.  [...] 1°) oui, mais en essayant de me corriger une fois chez moi, je me suis dit que non (car je me suis dit que j'avais peut-être confondu avec la technique de cartographie de l'expression des gènes qui elle utilise des sonde fluorescente).  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquence validée pour sonde GAPDH

Je suis étudiant en thèse. Je suis actuellement en train de mettre au point un Northern blot afin de valider la spécificité d'une sonde pour mon gène d'intérêt, sonde que j'utiliserai ensuite pour étudier la néobiosynthèse des ARNm de ce gène par transcription run-off.  [...] Problème. je n'obtiens qu'un ladder d'ARN marqué. J'essaie donc de savoir si ce problème de spécificité de ma sonde est du à un problème de conditions d'hybridation ou à la sonde elle-même. Je cherche donc une sonde pour un gène de ménage dont la spécificité est avérée.  [...]

[Biochimie] Dot Blot et Northern Blot

Le nothern blot, on fait migrer des ARN dans un gel afin de les séparer. On les transfère sur une membrane et on révèle la ou les bandes qui nous intéressent grâce à l'hybridation de sonde ribonucléiques marquées.  [...] Le dot blot sur les acides nucleiques ca sert pour l'ARN. quantification de l'expression (quantifier sur des dot est beaucoup plus simple et juste que sur une bande d'electrophorese).  [...]

quantification sonde HIS

salut, a cause d'un oublie malheureux dans mon manuscript de these je suis en galere. Voila j'ai l'habitude de quantifier mes sondes ARN pour l'hybridation in situ avec une migration sur gel, basée sur l'estimation visuel de la production de sonde par rapport a la quantité initiale de plasmide.  [...] DU genre le signal est X fois plus fort. Ensuite je convertisait le tout en ng/microL/Kb a l'aide d'une formule un peu compliquée dont je ne me souviens plus.   [...]

Hybridation in situ

Enfin tu laves à EtOH 70° tu centrifuges une dernière fois, tu vides, tu seches et tu reprends dans 100 ou 200 microL de tampon d'hybridation en fonction du gel que tu auras fais un peu plus tôt.  [...] Ben parce que le principe c'est d'hybrider des ARNs... la sonde est une sonde ARN antisens à l'ARN natif présent sur les coupes et que tu cherches à réveler.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation in situ et digoxygénine

Fixation au formaldéhyde (+ coupes si l'organisme n'est pas étudié in toto ) =. Perméabilisation (traitement à la protéinase K) =. Hybridation (ajout de la sonde ARN complémentaire) =. Lavage (élimination des sondes qui ne complémentent pas) =. Saturation des sites anticorps anti-digoxygénine =. Révélation (phosphatase alcaline etc.).  [...] Ma question est. la digoxygénine est-elle déjà fixée sur la sonde complémentaire lors de l'étape d'hybridation à proprement dit ou est-elle incorporée après le lavage.  [...]

[Microbiologie] le screening

je cherche les cellules souche microbienne(comment les isoler et les selectionner) et pour le screening je veux connaitre l'explication de cette methode en generale merci.   [...] Par hybridation sur colonies. avec une sonde spécifique d'un ARNm que tu cherches dans ta banque.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

Quel est le nom svp de la technique qui utilise l'hybridation d'une sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse.  [...] je pense que cette technique est le northern blot c'est à dire le transfert d'ARN sur membrane de nitrocelluloseou nylon à partir d'un gel d agarose, par capillarité suivie d'une étape d'hybridation à ADN complémentaire et c'est là qu'intervient la reverse transcriptase car c'est une enzyme qui permet à partir d'un ARN d'obtenir un ADN complémentaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

ADNg digéré par HindIII + hybridation sonde H. on obtient un signal d'hybridation de 0,3Kb.  [...] Or notre sonde N d'ADNc de 1Kb (je rappelle NcoI/NcoI) ne possède pas de site de restriction pour HindIII donc il existe un site de restriction pour HindIII dans l'intron de 0,8Kb.  [...]