• Santé - ARN, Sang, Total

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs.  [...] J'aimerai demander si la conservation du sang total à -4 ou -20C affecterait les ARNs circulants et le rendement de l'extraction de ces derniers et si vous pouvez m'indiquer la période et la température optimale de stockage/conservation des prélèvements sanguins qui permet de préserver les ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] housekeeping lymphocyte gene

HPRT est effectivement un gene de reference pour RQ, mais il n'est pas specifique des lymphos... Nous avons besoin d'un referent specifique des lymphos pour normaliser par rapport a d'autres ARN que nous extraire en meme temps sur du sang total. Malheureusement pour nous, les volumes de sang sont trop petits pour du sorting.  [...] JE pense que nous allons prendre CD3e et B220 vraiment spe des T et des B.   [...]

[Biologie Moléculaire] EXTRACTION ARNt

Bonsoir, je viens de me lancer dans des expériences d'extraction d'ARNt à partir du sang total.dans ma première extraction j'ai obtenu un randement de 2,1 (DO260=0,069) avec une concentration de 69ug/ml qui me parrait faible. dans l'étape de rétrotranscription selon le protocol je dois prendre 1ug/ul d'ARN alors que mon échantillon a une concentration faible(0,069ug/ul), je ne sais pas quoi faire dans ce cas, est-ce que je peux doubler de volume pour régler ce probleme.  [...] une autre question me préoccupe, la valeur de 69 est la concentration, alors comment déterminer la quantité de mon ARNt.   [...]

Résultats | Dossier

Le niveau d'expression de la COX-1, comme pour tous les résultats observés en sang total, n'est pas changé par une stimulation par le calcium ionophore. La COX-2 est très faiblement exprimée, en effet elle commence à être détectée à partir d'une concentration en calcium ionophore de 50 µM et sa quantité maximale est nettement inférieure à celle que nous avons déjà eue l'occasion de rencontrer dans ces différents cas de stimulation.  [...] Cette première étape a consisté à définir le meilleur choix cellulaire ainsi que les conditions de stimulation les plus favorables à notre modèle. Les types cellulaires étudiés sont un mélange de lymphocytes et de monocytes, les granulocytes neutrophiles et le sang total.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème PCR : Besoin d'aide

1) Je fais une extraction d'ARN (trizol chloroform) sur échantillon de sang (bovin ou ovin). J'extrais donc l'ARN de l'hôte + l'ARN viral (s'il est présent).  [...] Je ne suis pas sûre que la remarque suivante sera très pertinente dans ton cas mais bon... Tu pars d'échantillons totaux si j'ai bien compris. Dans mon cas, je partais de sang total et je me suis rendue compte que les ARN eucaryotes gênaient pour la suite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Q-CPCR encore !

Je pars de la même quantité de tissu, et j'ai des rendements d'ARN différents en fonction de je prélève mon tissu, et on sait que c'est normal. Donc je pense qu'il faut que je ramène le tout à la quantité d'ARN total.  [...] Et c'est là que ca me pose problème. SI tu prends un gène qui est est autant exprimé dans 500 ng d'ARN dans deux tissus différents (avec les répétitions qui vont avec..), tu dis que c'est un gène de référence, mais si tu ramènes ca à la quantité d'ARN total celui n'est plus un gène de référence bien qu'on soit à la meme quantité de matière.  [...]

[Biologie Moléculaire] Meilleure technique d'extraction ?

En fait je travaille sur sang total, à partir de prélèvement de patients en tubes héparine-lithium (on cherche à caractériser des gènes impliqués dans le retard psycho-moteur). A partir de ces échantillons, on utilise la technique de CGH-Array.  [...] Je ne connais pas les détails des conditions d'hybridation sur CGH. As-tu un seuil de quantité d'ADN pour pouvoir hybrider Dans mon cas, je m'intéressais aux quelques minimes copies de génomes viraux que je pouvais chopper dans le sang total et donc, je devais avoir au minimum 10 7-8 copies de génomes viraux pour espérer détecter quoi que ce soit sur la puce.  [...]

Don du sang : est-ce dangereux ?

le don de sang total est le plus courant. On prélève au donneur environ 500 millilitres de son sang, soit 10 % du volume sanguin total, et les différents éléments du sang sont séparés ensuite en trois. plaquettes, plasma et globules rouges.  [...] Lorsqu'on est parfaite santé, il est possible de donner son sang en toute sécurité. Les personnes malades ( hypertension ou hypotension, diabète, épilepsie...), infectées, anémiques ou enceintes ne sont pas autorisées à donner leur sang pour préserver leur santé et celle des receveurs.  [...]

Discussion | Dossier

Dans cet objectif, nous avons testé comme matériel cellulaire les granulocytes neutrophiles, une suspension composée de lymphocytes et de monocytes et enfin un modèle utilisant le sang total. Les expérimentations mises en oeuvre se sont faites avec différents temps d'incubation et avec des concentrations variables en activateur.  [...] Notre modèle a de nombreux avantages. Comme nous ne travaillons pas avec du sang total, les protéines plasmatiques ne peuvent pas interférer avec les mesures faites par la suite. Les études d'inhibition se faisant sur des cellules entières et non pas sur des enzymes isolées, nous tenons compte des problèmes des passages membranaires, ce qui nous rapproche des conditions physiologiques d'utilisation des composés testés.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

Dans mon cas, j'utilise des dilutions au 10e, 30e et 90e. Ce qui revient à faire les quantif sur environ 50, 17 et 5 ng d'ARN totaux. Et là, en tenant compte de la dilution bien sur, j'obtiens 3 fois le même nombre de copies.  [...] Ceci dit j'arrivais à détecter des expressions très faibles avec mes PCR de 40 cycles (sur GeneAmp 5700). La plus faible a été 23 copies/ng ARN total.  [...]