• Santé - ARN, Quantité, Rendement

[Biologie Moléculaire] Quantité d'ARN pour PCRq

J'aurais aimé savoir quel est la quantité requise en ARN pour faire de la PCRq. J'imagine que ca dépend de la sensibilité de la machine, mais c'est juste pour avoir un ordre d'idée car comme je fais la microextraction savoir si je suis vraiment loin du compte ou si ma microextraction suffit et évitera de pooler des échantillons.  [...] Ca le fait très très très largement, pas d'inquiètude, l'ARN que j'extrais n'est même pas dosable au nanodrop vu la mince quantité mais en faisant une RT avec des random hexameres pour améliorer le rendement, les ADNc fonctionnent très bien en PCRq.  [...]

[Biologie Moléculaire] Informations gènes menagers HPRT pour QPCR

Quel est votre rendement en ARN quelle quantité dans la RT quelle dilution pour la qPCR.  [...] Alors mon rendement en adn était en moyenne entre 3000 et 5000 ng/ul (25 échantillons). j'ai réalisé plusieurs dilution. une pour arriver à 1000 ng/ul de concentration et ensuite une pour arriver à 100 ng/ul et la derniere avec le mix 8 ul de mix et 2 ul dadn) pour arriver à 20 ng/puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

Je suis entrain d'optimiser une extraction d'ARN chez le chêne Liège. J'ai essayé un kit commercialisé mais la pureté et le rendement en ARN est très faible. J'ai trouvé ds un article un kit maison, il utilise du glycogene pour précipiter l'ARN. Est ce que qlq'1 connaît un autre produit pour substituer le glycogene.  [...] Tout ce que le glycogène fait c'est co-précipiter l'ARN. Je ne connais rien qu'on puisse utiliser à la place, mais surtout ce n'est pas ça qui changera radicalement le rendement.  [...]

[Biotechnologie] Comment déterminer le rendement d'une RT?

En fait je suis en train de me dire que si tu doses ou determine avant et après ta quantité d'acide nucléique tu peux connaitre le rendement.  [...] La seule methode pour determiner un rendement de RT est de rajouter un ARN de synthese pur et de quantitee connue. Si tu sais combien tu met de cet ARN au depart, tu va le traiter comme les autres lors de la RT et lors de ta PCR tu va quantifier ton ADNc provenant de cet ARN en meme temps que tes echantillons.  [...]

[Biochimie] [TP Séparation de molécules par chromatographie d'exclusion sur colonne] Niveau L1S1

- Deuxième question. Calculer le rendement de purification du cytochrome c après passage dans la colonne. Il faut utiliser la formule. (quantité totale récuperée / quantité initiale )*100. Or il me faut la quantité initiale du coup.  [...] ..Tu n'as pas de courbe de Gauss à tracer Si non tu n'a pas de masse moléculaire à déterminer donc tu divises m du cytc en g par 12400 tu fais pareil avec le théorique et tu divises la quantité expérimentale sur celle théorique tu multiplies par 100 et tu as ton rendement =).  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

Merci à vous, j'ai essayé le kit Micro de Qiagen, et les résultats sont assez bons, mais je trouve le Picopure de chez Arcturus plus facile d'utilisation et il offre des résultats tout aussi satisfaisants. Nous travaillons sur des très faibles quantités de matériel, ce qui ne nous facilite pas la tâche mais bon, c'est aussi ça la bio, il faut savoir s'adapter à toutes les situations... Bonne journée à tous.  [...] On utilise le kit qiagen quantitect et nous en sommes très content. On peut travailler avec de faibles quantités de materiel au départ (1µg d'ARN mais voir la suite), le rendement est plus que bon. Trop bon même étant donné que si le protocole invite à une dilution finale dans 20µl nous diluons toujours immédiatement dans 200µl et ensuite on ajuste.  [...]

[Biochimie] problèmes avec ARN long et structuré

Je viens de commencer en thèse et j'ai besoin de conseils relatifs à la synthèse et au marquage radioactif d'un ARN. Je suis confrontée à deux types de problèmes. le premier, j'ai un très faible rendement lorsque je transcrit cet ARN (0,6 ou 0,8µl/µg max).  [...] Je dois préciser que cet ARN est tres long et très structuré. 514 nucléotides et 14 tiges boucles.. Je le purifie sur gel acryl/bisacryl 5% après transcription. J'ai lu plusieurs fois que pour de si longs ARN, une purification sur colonne HPLC était mieux niveau rendement, par contre, il n'est pas vraiment possible de séparer les produits de transcription abortive ou les dégradations.. Qu'en pensez vous.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

J'ai essayé plusieurs protocoles d'extraction d'ARN car je travaille sur l'ARN circulant plasmatique et j'essaye d'optimiser mon rendement d'ARN avant d'agir sur la contamination par les sels ou le phénol.  [...] Je n'ai pas pu faire un agilent encore pour visualiser la différence de qualitécar je dois sous-traiter mais j'ai déplacé mon pic de 230 vers 220 nm. Cependant j'essaierai quand même l'étape au chloroforme supplémentaire même si j'obtient des résultats PCR assez correct avec mon ARN actuel.  [...]

calcul d'une quantité d'ADN- PCR

Dans un échantillon de 1 microg d'ADN, on a 1pg de fragment à amplifier. Quelle quantité d'ADN amplifié obtiendra-t-on après 30 cycles de PCR, en admettant un rendement de 10puisssance 6.  [...] Du coup pour obtenir la quantité d'ADN à la fin du protocole d'amplification, il suffirait de multiplier par le rendement. On obtient ainsi 1 µg du fragment choisi amplifié dans le mélange final.  [...]

[Biologie Moléculaire] Concentration dosage ARN

Ben normalement t'auras un smear si t'arrives à le voir, avec deux bandes plus intenses en bas de ton gel correspondant aux ARN ribosomiques (toujours dans le cas où t'arrives à les voir). Dire s'ils sont dégradés ou pas à partir d'un smear.  [...] Ca me parait juste énorme d'avoir de telles concentrations grâce à un kit commercial. J'avais des rendements dans ces eaux là mais par la bonne vieille méthode de l'extraction au phénol, mes rendements par kit étaient beaucoup moins importants.  [...]