• Santé - ARN, Promoteur, Vecteur

clonage insert

L'insert de 2825 pb est cloné dans un vecteur sous le contrôle d'un promoteur phagique Psp6. Après linéarisation du vecteur recombinant, celui ci est incubé en présence de l'ARN polymérase Psp6 et des 4XTP.  [...] Le vecteur recombinant est linéarisé puis incubé avec une ARNpol reconnaissant le promoteur Psp6 qui se trouve également sur ton vecteur et si tu met ça avec des DNTPs j'imagine qu'il se passe une reverse transcription.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transcription in-vitro

Puisque mon vecteur c'est de l'ADN double brin, l'ARN polymérase devrait pouvoir se fixer sur le promoteur même si mon vecteur est encore circularisé non.  [...] Normalement on linéarise un plasmide pour pouvoir mettre un terme à la transcription in vitro. Si on ne linéarise pas, la polymérase transcrit et ne s'arrête pas. Je trouve ça étonnant de linéariser pour aider la polymérase à transcrire. Un vecteur de clonage est constitué de deux promoteurs, un qui sera en amont de notre gène (ADNc) et l'autre en aval.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN antisens à partir d'un fragment de gène

Ces phages ont des ARN polymérases très efficaces et des promoteurs très simples et petits. Ils vont permettre de fabriquer in vitro de l'ARN.  [...] Un plasmide vecteur de clonage créé artificiellement peut avoir autour de son MCS (Multiple Cloning Site) deux promoteurs différents (phages T7 et SP6), ce qui peut donner lieu à deux ARN (un sens et un antisens), selon que le démarrage de la transcription se fasse à un promoteur ou à l'autre.  [...]

[Génétique] le promoteur

oui le promoteur est une sequence d'ADN située en amont de la séquence codante. cette séquence promoteur signale effectivement où se situe le début de la transcription par l'ARN polymérase. Ce promoteur ne disparaît pas, c'est une séquence présente constitutivement dans le génome.  [...] Ce qui peut varier au niveau de ce promoteur, c'est la présence ou non de facteurs de transcription, c'est à dire des protéines qui vont faciliter l'arrivée de l'ARN polymérase pour déclencher l'expression d'un gène (par ex. suite l'action d'une hormone).  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN contaminé par de l'ADNgénomique

J'ai réalisé un traitement DNase de mes ARN lors de l'extraction ARN mais lorsque j'essaie d'amplifier mes ADNc avec des primers se trouvant dans le promoteur de mon plasmide ou à l'extérieur de mon ORF (après le teminateur et dans le promoteur), je sort toujours quelque chose, or je ne devrait pas puisque je recherche des ARNm (RT avec oligodT) qui, si mes souvenirs sont les bons, correspondent uniquement à l'ORF (ATG au STOP).  [...] Lorsque j'ai refait le test, j'ai testé en même temps sur des ARN DNasés, des ARN DNasés RNasés et des ARN non DNasés RNasés, voici les résultats de PCR sur ARN avec des primers toujours dans le promoteur.  [...]

[Biotechnologie] Vecteur d'expression et enzymes de restriction

En fait, cela permettrait d'incorporer le gène d'intérêt ainsi que son promoteur et son terminateur au sein du vecteur.  [...] On commence par insérer le promoteur qu'on lie au vecteur grâce à une ligase (en supposant bien sûr que les deux extrémités soient compatibles), puis on insère le gène qu'on lie au promoteur et enfin on fait de même avec le terminateur.  [...]

[Biologie Moléculaire] la transcription de l'ADN?

Donc en claire c'est le promoteur et le site de terminaison qui marque le début et la fin de transcription et qui permet à l'ARN polymérase de reconnaître les séquences à transcrire.  [...] Normalement oui. Classiquement chez les eucaryotes on a un promoteur par gène et donc on obtient un ARN monocistronique. A la différence des procaryotes où on a un promoteur pour plusieurs gènes (= opéron) formant ainsi des ARN polycistroniques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site d'initiation de la transcription

Les limites précises d'un promoteur ne sont pas nettes. En effet, au moins pour ce qui est du cas procaryote, même si le recrutement de l'ARN polymérase dépend de séquences en amont du (+1) de transcription, une fois liée elle recouvre au moins 20pb de plus en aval de ce (+1).  [...] Le point +1 ne fait pas partie du promoteur puisqu'il est la première base de l'ARN synthétisé. Un promoteur peut être transcrit dans le cas de points +1 alternatifs comme c'est le cas du VEGF (normalement appelés promoteurs alternatifs mais dans le cadre de cette explication, cela pourrait prêter à confusion.  [...]

Surexpression d'un gène

Dans le cas de la mutation du promoteur, (il s'agit de la séquence devant le gène, et qui va recuter les ARN polymerases), la nouvelle séquence du promoteur peut avoir une affinité augmentée pour les molécules qui vont recruter les ARN polymérases,  [...] dit autrement, les ARN polymérases vont être attiré plus facilement par cette séquence mutée que par l'ancienne, elle vont s'y fixer plus facilement et synthétiser le gène derrière le promoteur, beaucoup plus facilement qu'avant.  [...]

Différence shARN, miARN et siARN

shARN = transfection stable, ils s'intègrent dans le génome de la cellule hôte (avec possibilité de le mettre sous le contrôle d'un promoteur donné pour réguler son expression).  [...] Mais disons si je veux faire exprimer mon shARN uniquement dans un tissu précis (le rein) et uniquement quand une protéine précise est transcrite (par exemple l'aquaporine 2), je devrais utiliser un promoteur d'ARN polymérase 2 vu que l'aquaporine 2 est transcrite par l'ARN polymérase 2 (comme tous les ARNm), non.  [...]