• Santé - ARN, Phase aqueuse, ADN

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

Sinon en effet on purifie les 2 en basique (adn et arn). Pour ne garder que l'adn il faut avant traiter l'echantillon avec une RNAse.  [...] Si l'ARN et l'ADN sont en phase aqueuse on utilise une RNAse, DNAse free pour ne garder que les ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

Désolé mais tu te trompes, le trizole ne permet pas de séparer l'ADN de l'ARN. les protéines ne sont pas dans la phase phénolique mais dans l'anneau dont tu parles à l'interphase avec la phase aqueuse qui contien tous les acides nucléiques.  [...] J'ai dû mal m'exprimer, je sais que le trizol ne permet pas de les séparer, mais qu'il lyse seulement les cellules. Au labo dans lequel je suis on m'a pourtant expliqué que le colorant présent dans le trizol était soluble dans les solvant organique, ce qui fait qu'il se retrouve en bas (puisque visuellement j'ai bien une phase organique rose), que l'anneau du milieu représentait l'ADN, et la phase aqueuse en haut regroupait les ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN ARN extraction

J'ai horreur de presser les gens mais le problème c'est que j'aurais besoin de la réponse pour demain, il s'agit d'une question de mon TP d'aujourd'hui à laquelle je n'ai pas su répondre et je peux être interrogé a partir de demain dessus.   [...] Attention. pour faire des extractions d'ARN, il faut un phenol acide, et pour l'ADN un phénol tamponné. Si tu prends un phenol acide pour une extraction d'ADN, tu as un rendement très bas, car l'ADN reste dans le phenol et non dans la phase aqueuse.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN plasmidique

Pour le phenol, il se trouve qu'avant il fallait le saturé soit même et maintenant il s'achète tout fait, enfin saturé quoi. Pour l'extraction d'ADN on utilise du phénol saturé avec du tris et pour l'extraction d'ARN avec de l'eau. A ce que l'on m'a dit, les ARN reste dans la phase aqueuse et les protéines resteraient dégradées à l'interphase.  [...] SDS 3% me semble un peu beaucoup. De mémoire ça ne doit pas excéder 1%. 15 minutes, c'est long. 5 minutes suffisent. Quant à la question de fond qui est de savoir si la lyse est optimale, la réponse est oui à condition d'avoir bien resuspendu vos bactéries dans la solution glucose-EDTA-RNase (n'oubliez pas la RNase, sinon vous allez vous ramasser des ARNs qui vont vous embêtez).   [...]

TE dans phenol-chloroforme

Au contraire, je dilue mon ADN avec du TE pH 8.5 pour être sûre que mon ADN reste soluble dans la phase aqueuse.  [...] En même temps, il me semble qu'on utilise du phénol acide quand on bosse avec des ARN, mais là je ne suis plus du tout compétente.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN ethanol 70%

Peut on dire que les ARN sont dans la phase aqueuse parce qu'ils sont polaire.  [...] Merci pour la réponse, mais un point reste un peu obscure, les ARN sont insolubles dans l'alcool, c'est pour ça qu'ils précipitent c'est ça Et si ce que je vient de dire est juste, avec l'ethanol 70%, les ARN vont dans l'eau et les sels dans l'alcool.  [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

D'après ma compréhension, cette combinaison sert à rendre plus pure la phase aqueuse, en d'éliminant un maximum d'ADN et protéine s'y trouvant encore. Est-ce tout ou y a-t-il un autre but.  [...] En quoi est-il utile de modifier les températures La première étape sert-elle à favoriser la RT (60 minutes, on a de quoi être sûr que tout soit bien RT ) La deuxième étape (72°C) est-elle une phase d'amplification de l'ADNc (que se passe-t-il avec les brins hybrides à cette température).  [...]

phenol:chloroforme bizarre?

1- Ajouter phe.chl. isoamyl. à l'achantillon, mélanger, centrifuger. Prélever la phase aqueuse. Y ajouter du chl, centrifuger. Prélever la phase aqueuse. Précipiter l'ADN.  [...] 2- (le bizarre) Ajouter le phe, mélanger, centrifuger, et prelever la phase aqueuse. Ajouter chl.isoamyl. et précipiter (c'est la que ca coince, non).  [...]

Béta mercapto

Mon ADN est merdique à cause des protéines qui le saturent d'où mon envie d'utiliser le béta mercapto pour casser les ponts disulfures et espérer avoir un meilleur résultat. Comment et à quel moment reste mon mystère.  [...] autre idée, si vous avez suffisamment d'ADN, c'est de refaire une étape de phenol/chlo après avoir récupéré la phase aqueuse, 1 volume. 1 volume.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Je sais qu'on peut utiliser un tampon de lyse avec du SDS et de la protéinase K, mais je n'ai aucune idée des proportions, ni du temps d'incubation, ni de la température à utiliser… Quelqu'un pourrait-il m'éclairer.   [...] Après tu ajoute 1volume équivalent (0,3 ou 1 ml suivant le nombre des cellules) de phenol/chloroform/alcool isoamylique. Centrifuge 10 min à 1700g. Après tu transfert la phase aqueuse dans un nouveau tube et tu ajoutes 1/2 volume d'acétate d'ammonium 7,5M et 2 volume d'éthanol 100%, l'ADN devrait précipité immédiatement.  [...]