• Santé - ARN, Méthode, Extraction, Migration

[Biochimie] Extraction ARN

Je suis actuellement en train d'extraire des ARN viraux par méthode double extraction trizol-trizol LS et lorsque j'ai effectué la migration sur gel, je n'observe que très rarement les deux bandes caractéristiques à 18s et 28s. Normalement, je devrais observer deux belles bandes pour chaque échantillons puisqu'après quantification, j'ai pu voir que mes ARN étaient en concentration satisfaisante ( entre 0.5 et 1.8 µg/µL).  [...] Parmis mes reflexions, je me demandais si mes ARN étaient convenablement solubilisés ( 10min à 65°C) et si il était possible que je les résolubilisent un petit coup avant de réaliser la migration sur gel.  [...]

MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

je travailles sur des cellules MCF7 de cancer mammaire humain donc eucaryote. après mon extraction d'ARN et migration sur gel j'observe 3 bandes or je n'attends que 2 bandes correspondant aux ARN r 18S et 28S.  [...] effectivement mes échantillons d'ARN sont extraits o trizol (phénol-isothiocyanate de guanidine)-chloroforme, précipités à l'isopropanol et lavé à l'éthanol. protocole classique.  [...]

[Biologie Cellulaire] Western Blot ATM phosphorylé

J'ai déjà testé de nombreux protocoles sans succès (méthodes d'extraction différentes, migration sur petit/grand gel, transfert liquide/semi-sec..), donc j'aimerais savoir si quelqu'un possède un protocole précis ou des indications.  [...] Et, ATM est une grosse protéine, très peu abondante. Y a t-il une méthode d'extraction à privilégier de migration et de transfert.  [...]

Expériences en génétique…

Salut Piwi, merci de ta réponse. J'aimerai toutefois savoir si le morceau d'ADN, qui est intorduit, ne contient que le gène qui code la protéine en question Et comment isoler ce gène(la méthode d'extraction et la source de provenance) Je ne pense pas qu'on peut effectuer une telle expérience chez soi, même s'il l'on a un minimum de matériel, est-ce que je me trompe.  [...] Et la je ne suis pas vraiment d'accord. en general pour trouver un gene specifique, on utilise plutot une sonde radioactive (adn (ou arn) complementaire du gene à identifier, marqué radioactivement, par exemple, au phosphore 32). Pour cette methode, il faut denaturer l'adn apres la migration, en general, par la soude.  [...]

[Biologie Cellulaire] Arn

bonjour jai deux petites question que je me pose par rapport à mon cour mais auxquelles je n'arrive pas à répondre de quel paramètre dépend la distance de migration des molécules d'ARN Et pourquoi les ARN migrent-ils vers l'anode.  [...] - Les nucléotides constituant l'ARN (et l'ADN) portent un groupement phosphate qui est chargé positivement et qui permet, pendant une électrophorèse, la migration vers le pôle chargé positivement de la cuve (donc la cathode..).  [...]

[Génétique] Diagnostic mutation autosomique récessive

Une réaction de PCR permet l'amplification de cette région, que celle-ci soit normale (absence de la mutation deltaF508) ou mutée (présence de la mutation). La distinction entre les trois génotypes possibles (N/N, F508del/N ou F508del/F508del) peut être obtenue par électrophorèse sur gel de polyacrylamide et visualisation des produits de PCR aux U.V.   [...] J'ai globalement compris la méthode avec la PCR puis la migration sur un gel électrophorétique puis grâce a cette migration on peut distinguer les 3 génotypes comme décrit ci-dessus.  [...]

[Biochimie] Extraction d'une protéine nucléaire pour WB

J'ai d'abord commencer à faire une extraction au SDS (plus cocktail d'inihibiteur), j'ai aussi essayé tampon d'extraction classique (Triton, Glycerol, NaCl, EDTA, anti protéases). Apres dosage et dilution dans lameli, j'ai fait un WB (migration sur gel 10% SDS.  [...] Le probleme c'est que ma protéine est pas très exprimé et les anticorps ne sont pas de très bonne qualité (et les tampons d'extraction pas forcement les meilleurs), au final j'ai beaucoup de non spécifique, pas beaucoup de signal au niveau de ma bande.  [...]

[Biologie Moléculaire] décontamination BET

C'est une question très importante surtout si le gel a été coloré avant la migration, c.à.d. au moment de la préparation du gel qu'on rajoute le BET puis on dépose les échantillons dans les puis et on les laisse migrer. on utilisant cette méthode de coloration, tous le matériels utilisés doit être décontaminer (paillasse, support du gel, cuve à électrophorèse.  [...] ..). La méthode la moins polluante est celle basée sur la coloration du gel après migration dans une chambre isolée spéciale pour la coloration. et malgré cela, il est nécessaire de décontaminer le matériel.  [...]

Les contaminants chimiques ou microbiens des aliments | Dossier

Quand un aliment est mis au contact d'un matériau, il peut s'établir entre eux des interactions conduisant à des échanges de matière. Ces phénomènes, appelés migrations, sont quelquefois volontairement recherchés (ex. vieillissement du vin en fût de chêne) mais apportent souvent des défauts organoleptiques (ex.  [...] Des conclusions ont été formulées en matière de relations structure / migration, comportement du matériau en vieillissement au contact de l'eau chaude et d' irradiation, d'amélioration des techniques officielles de suivi des migrations par l'utilisation de techniques d'extraction telles que l'extraction solide/liquide, la microextraction en phase solide ou la désorption thermique.  [...]

migration électrophorétique d'ARN

en travaux pratiques de génétique j'ai réalisé une migration électrophorétique d'ARN de levure que je dois analyser. Pour cela j'ai fait un dépot de témoin d'ARN de transfert et de témoin d'ARN ribosomiques. Et dans le cas des ARNr j'obtiens 4 bandes, et je ne comprends pas trop pourquoi.  [...] les 2 bandes qui ont migré le plus loin sont assez intenses donc je suppose qu'elles correspondent aux 2 sous-unités ribosomales (18S et 23S), mais pour ce qui est des 2 autres bandes, je n'arrive pas à savoir ce que c'est, elles ont migré moins loin que les précédentes et sont très peu intenses.   [...]