• Santé - ARN, Membrane plasmique, Intégrité

Problème de biologie moléculaire

Imaginons que j'ai isolé un mutant grâce à des ARN interférents afin d'en avoir un avec une membrane plasmique d'intégrité réduite. Maintenant, j'ai taggé le gène en question avec de la GFP et je remarque que le produit de ce dernier est entièrement localisé dans le noyau de la cellule.  [...] C'est une question théorique sur laquelle je suis tombé pour un exercice. L'énoncé ne précise pas l'organisme, toutefois il précise la présence d'un noyau. L'énoncé ne dit rien non plus à propos du gène. Il est dit qu'après avoir fait un screen aux RNAi pour des mutants dont l'intégrité de la membrane est réduite, un mutant est sélectionné et le produit du gène touché par le RNAi est taggé à la GFP.  [...]

[Biologie Cellulaire] adaptation protocole confocal à cytométrie en flux

Si tu as peur que l'intégrité de la membrane plasmique ait souffert à cause de la trypsine, je te rassure, cette méthode est employé pour faire des marquages AnnexinV / PI qui repose essentiellement sur les propriétés de la membrane plasmique (flopping de la phosphatidylsérine pour annexinV, perméabilité de la membrane pour PI) pour discriminer les stades de mort cellulaire.  [...] Il vaut mieux que la membrane plasmique reste intacte pour ce marquage qui marche bien de cette façon donc pas de souci de ce côté là. La trypsine n'est pas une enzyme liposoluble donc elle reste bien en dehors des cellules et n'attaque que les protéines de surface.  [...]

[Biologie Cellulaire] internalisation cellulaires de pro-drogues

en ciblant des petites molécules acylée, estérifiées. où trouver des références mentionnant que des groupements protecteurs tels que des esters de fonctions phosphates, phosphonates, sur ce types de petites molécules (hors acides aminés et peptides), qui plus est, très hydrophobes, permettent d'améliorer l'internalisation des molécules à l'intérieur des cellules animales.   [...] Je suis d'accord. augmenter l'hydrophobicité des molécules devraient à priori améliorer leur passage au travers de la membrane plasmique cellulaire à condition que ça ne dégrade pas l'intégrité des membranes et la démonstration de ce type de mécanisme ne doit pas être aisé.  [...]

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Cette étape a pour but de vérifier qu'aucun autre constituant sanguin n'est susceptible d'interférer sur l'activation de la COX-2 ( plaquettes, protéines plasmatiques...). Comme nous avons fait varier les conditions de concentrations et de temps pour divers stimulants pour les cellules étudiées précédemment, nous avons procédé de même pour cette étape.   [...] La deuxième précaution à prendre concerne la toxicité de ces composés par rapport aux membranes plasmiques des lymphocytes et des monocytes. Pour chacun d'entre eux, nous avons pratiqué un test de lactate déshydrogénase. Nous n'avons pas trouvé de produit qui altérait l'intégrité de la membrane cellulaire, donc aucun n'est cytotoxique dans les conditions de notre expérimentation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Que devient l'ARNr dans une reaction de RT

Concernant le prix, je ne sais pas il faut se renseigner chez les fournisseurs (Interchim ou Agilent), mon laboratoire n'en possède pas, mais je travaille dans un centre ou il y une plateforme de génomique et de protéomique. Donc je paye pour l'utiliser.   [...] Je fais de la Q-PCR donc c'est vraiment important pour moi de vérifier la qualité de mes ARN. L'avantage c'est qu'on peut déterminer la quantité et l'intégrité de nos ARN en une seule manipe grâce au fameux RIN. Voici un lien d'une publi sur l'importance de l'intégrité de l'ARN.  [...]

[Biologie Cellulaire] pH acide et bactéries

Je suis à la recherche de toute sorte d'informations sur l'effet du pH acide sur les cellules et en particulier les bactéries. Je sais que l'acidité dégrade tout, membrane, ADN etc... mais j'aimerai avoir plus de détails sur le mode d'action sur les bactéries, j'ai entendu parler d'effets sur certains acides aminés etc mais je ne suis pas sure donc si vous avez des sites ou des publications qui détaille l'effet, j'aimerai vraiment me documenter sur le sujet et je n'ai pas de cours sur le sujet.  [...] le pH peut permettre ou empêcher certaines molécules de passer la membrane plasmique (c'est le cas par exemple chez les plantes avec l'auxine, ce qu'on appelle la croissance acide à l'auxine correspond au fait qu'en pH acide les charges présentes sur l'auxine vont disparaitre et lui permettre de passer plus facilement dans la cellule puisque les charges et donc la polarité de l'auxine l'empêchait de diffuser librement et demandais la nécessité de protéines spéciales pour passer la membrane, en pH acide l'auxine peut passer meme sans protéine de transport.).  [...]

Apparition de l'ADN

D'abord la mutation U vers C demeure rare, l'ARN conserve son intégrité informationelle avec ses U, la preuve l'existence de tout un tas de virus ARN.  [...] Il n'y a pas à priori de gradient de protection entre la membrane du noyay et le pas-de membrane... ce changement brusque est possible uniquement si l'ADN contenu n'est pas destiné à être utilisé tout de suite (j'avoue ça laisse d'autre possibilité remarque.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment savoir qu'un ARNm est entier ?

J'ai fais l'observation que certaines tumeurs expriment une protéine membranaire normalement exprimée dans le rein. Pour voire ça j'ai utilisé dans un premier temps la technique de PCR temps-réel avec un couple d'amorce (qiagen) dans la partie centrale du messager.  [...] Pour vérifier l'intégrité de l'ARN, ce qu'on peut faire c'est RT PCR circulaire. Tu extrait les mRNA, ligation sur eux mêmes puis PCR. Mais je sui d'accord avec les autres l'explication dues aux ARN me parait pas convaincante.  [...]

[Biochimie] rapport 28S/18S

Je suis probablement complétement à coté de la case mais quand je vois 28S et 18S je vois des sous unité ribosomique. Peux tu nous donner le contexte.   [...] L'absence de traînées en particulier sous la bande 18S et un rapport d'intensité des bandes 28S/18S d'environ 2, garantissent l'intégrité des ARN.  [...]

Apocrinie

je suis en train de réviser le chapitre de la membrane plasmique plus précisément ses fonctions associées à des modifications de sa forme. alors on trouve l'endocytose, l'exocytose, l'APOCRINIE... ( il est mentionné dans le cours c'est l'exportation de matériel par bourgeonnement ).  [...] Les cellules glandulaires ont plusieurs modes de sécrétion. L'apocrinie est l'une d'entre elles, le produit de sécrétion accumulé au pôle apical est éliminé par apocytose. La membrane apicale se détache et entoure le produit de sécrétion. La cellule glandulaire conserve cependant l'intégrité de sa membrane et ses organites, elle peut ainsi reprendre un cycle sécrétoire.  [...]