• Santé - ARN, Glace, ADN

[Biologie Moléculaire] Pcr

Quelqu'un pour me mettre sur la voie J'imagine que la glace c'est pour conserver des conditions optimales pour les nucléotides, mais pq sur glace alors qu'ensuite lors de la PCR ce sera chauffé jusqu'à 95°C Et l'eau, parce que ça absorbe bien la chaleur Ou pas.  [...] pour mes PCR en temps réel et quand je doit travailler avec de l'ARN,je met l'ARN sur glace car contrairement à l'ADN,il se dégrade à cause de la chaleur,donc si tu ne travail pas sur glace,tu ne devrais pas trouver de bons résultats mais attention l'ADN doit être amplifié dans le thermocycleur et il supporte la chaleur donc pour amplification d'ADN pas besoin de travailler sur glace,j'espère avoir bien répondu à ta question et que ceci pourra t'aider.  [...]

Conservation d'échantillons biologiques à t° ambiante

Au pire transporte tes échantillons dans un sachet étanche recouvert de glace, ce sera toujours mieux que la température ambiante. Comme l'a dit Gorben si c'estpour en extraire de l'ADN ca ne devrait pas poser de soucis, ca ne serait pas le même problème si tu voulais en extraire de l'ARN.  [...] Je rejoins l'avis de ceux qui pensent que ca ne posera pas (trop) de problème. Il ne sert à rien à mon avis de rajouter de la glace dans le colis, celle ci va fondre en quelques heures. J'ai déjà fait l'essai de laisser un bac de polystirène fermé contenant de la carboglace sur la paillasse. moins de 24h après il ne restait plus rien.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fragment de Klenow - glace- séparation brins

J'utilise cet enzyme afin de synthétiser le deuxième brin d'ADN lors d'une rétrotranscription. Je me demande s'il est nécessaire de mettre les tubes dans la glace avant le run (37°C 10 min pour la synthèse puis 75°C 10 min pour l'inactivation de l'enzyme), afin de garder les brins séparés.  [...] Dans ce cas oui cela ne coute rien et ne craint rien de mettre les RT dans la glace apres inactivation de la SSIII pour éviter les hétéroduplex ADN/ARN. Par contre dire si c'est indispensable.  [...]

[Biologie Moléculaire] éléctrophorèse d'ADN

1- On fait cela pour les ARN, pour éviter que le gel ne présente des formes structurées des ARN et non les formes linéaires que l'on recherche pour déterminer la taille de chaque bande. Sans dénaturer, le profil de migration ressemble pratiquement à un marqueur de PM.  [...] 2- Le bleu de dépôt contient du bleu de bromophénol (un colorant qui permet de suivre l'avancée de la migration) et de quoi rendre ton ADN plus lourd pour qu'il rentre plus facilement dans ton puit (sinon, il ne tombe pas quand tu déposes, et c'est relou ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Concentration dosage ARN

edit. sinon pour vérifier si mes ARN ne sont pas trop dégradé, j'envisage de faire un gel non-dénaturant. Hormis des précautions style ARN dans la glace/port des gants/etc... des avis sur cette méthode.  [...] Ca me parait juste énorme d'avoir de telles concentrations grâce à un kit commercial. J'avais des rendements dans ces eaux là mais par la bonne vieille méthode de l'extraction au phénol, mes rendements par kit étaient beaucoup moins importants.   [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

Concernant le bioanalyseur il permet une détection de la qualité des ARN grâce aux ARNr car ceux ci sont ultra majoritaires dans la cellule et qu'il lui est impossible de détecter les ARNm. Donc si t'as deux beaux pics d'ARNr c'est que ton ARN est correct par contre si tu ne retrouve pas ces deux pics c'est que ton ARNr est dégradé et par conséquent ton ARNm aussi.  [...] Certains ARN sont bourrés de structures secondaires. Cela permet de les enlever. L'étape importante est de placer les ARN directement dans la glace apres l'étape a 65°, car les laisser regagner la température d'élongation (42°) leur permettrait de se renaturer.  [...]

Echec de qPCR

J'ai confirme que la RT est bien marché. parce que j'ai fait le 18S et j'ai eu des bonnes résultats. je voudrais vous demande si il un problème avec le SYBER, comment je pourrais détecter ça.   [...] 2- Préparer les ARN à la concentration déterminée (en 1er l'eau), les décongeler sur glace puis vortéxer + speen.  [...]

Création de dinosaures : possible ?

Ca me fait penser aux évènements du mammouth retrouvé dans la glace et qu'ils souhaitaient cloner... Je n'ai pas entendu de nouvelles depuis. Serait-ce parce qu'ils n'ont pas réussit à le faire (Ou qu'ils n'ont pas réussit à récuperer de l'ADN malgrés les conditions de conservation.).  [...] Enssuite pour ce qui est des gens qui disent, retrouver l'ADN c'est impossible etc., j'en sais rien j'y connais rien mais je rappel qu'il y à eu il y a quelques petites années un petit boom médiatique (sur TF1 je me souvien) sur le fait qu'on à retrouvé un dino intacte congelé dans la glace.  [...]

[Biologie Moléculaire] Précaution pour etude méthylation ADN

je vais devoir faire une étude de la méthylation d'une region, surement par traitement bisulfite et sequencage et j'aurais aimé savoir s'il y avait des précautions à prendre pour la préparation des ADN.  [...] Merci pour vos réponses, c'est ce que je fais tout le temps avec mes ADN donc çà devrait aller. Je pensais qu'il y avait peut être des techniques d'extraction, ou de précipitation particulière.  [...]

[Génétique] les différentes étapes pour une PCR

C'est pour activer la polymérase. Afin d'éviter l'amplification de produits aspécifiques pendant la préparation de la PCR, les dernières générations de Taq doivent être activée à la chaleur (Hot Start en anglais). Il se peut aussi que ta Taq ait été incubée avec des anticorps bloquant son activité.   [...] Ceci est valable pour l'ADN génomique. Pour un plasmide, 2 min suffisent largement. Pour l'ADN génomique, je préfère chauffer une fois pour toute à 95° pendant 10min, puis mettre sur glace (important pour que les 2 brins ne se ré apparient pas totalement).  [...]