• Santé - ARN, ADN, Sonde

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

Tu as ton ARN, tu lui hybrides une amorce ADN (qui peut-être une sonde marquée visualisable sur Northern Blot) et à l'aide d'une ADN polymérase ARN dépendante, tu produis un ADN complémentaire de cet ARN. Donc oui tu peux appeler ça une réaction de transcription inverse je pense.  [...] Je pense qu'il pourrait s'agir de la transcription inverse cependant un détail m'intrigue. l'hybridation de la sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse. La transcription inverse s'effectue dans un tube sans que les ARN aient été séparés auparavant.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

Pouvez vous m'expliquer simplement la façon dont on crée une ribosonde Je ne comprends pas en effet ce que contient le vecteur au départ (de l'ARN ou de l'ADN), pourquoi on l'appelle ribosonde et pas sonde tout court. D'ailleurs, c'est de l'ARN la ribosonde Bref, merci beaucoup d'avance.  [...] Ne pas oublier que la réaction de transcription ne synthétise qu'à partir d'un seul des deux brins de l'ADN. Ne pas se tromper de brin si l'on veux utiliser cette sonde pour un Northern blot.  [...]

[Biologie Moléculaire] hybridation moléculaire

ou chromosome) dans le génome des souches d'une bacterie enterique l'ADN des souches a été digéré avec l'enzyme I-CeuI, et une électrophorèse en champ pulsé a été lieu(figure A) ensuite une hybridation avec une sonde marquée spécifique du gène bal1(figure B ) et une sonde du gène de l'ARN ribosomal 16S (figure C).  [...] je veux faire une interprétation des résultats des deux hybridation pour les 5 souche(P1,P2...) (pour la souche LT2 et BD sont des souche de reference).   [...]

Isoler un ARNm

Bon alors le mieux c'est de lyser les cellules par les méthodes classiques, avec en plus un inhibiteur des RNases. Après tu fais une centri (10000rmp pendant 10-15 minutes) pour enlever les membrane et les organites. Après le mieux est de faire agir une DNase après avoir fait agir un dénaturant de protéines (SDS, beta-mercapto,   [...] ..) qui enlèvera les protéines liées à l'ADN pour mieux le dégrader. Avec ce que tu récupère (ARN plus ou moins purs), tu peux ensuite faire un gel dénaturant puis hybrider une sonde spécifique de l'ARNm que tu veux purifier (Northern). Tu auras donc une seule bande si ta sonde est assez spécifique et que tu n'as pas perdu ton ARNm en cours de route (normalement non ).  [...]

biologie moléculaire

connaisons que toutes les cellules d'un meme animal contiennent des génomes identiques, dans une expérience, un tissu composé de multiples types cellulaires est fixé et soumis à une hybridation avec une sonde d'ADN spécifique d'un géne particulier. à votre grande surprise, le signal d'hybridation est brin plus fort dans certaines cellules que dans autre, est ce quelqu'un peut me donner une explication détaillée.  [...] si ta sonde hybride les ARN (les duplex ARN/ADN ca existe ), ca vient juste représenter la différence d'expression des gènes dans les différentes celulles,  [...]

problèmes de Northern

On a utilisé une sonde actine, purification sur colonne sephadex, et on se retrouve après révélation avec un profil uniquement ARN, pas d'ADN.  [...] Le forum Pr ésentez-vous, comme son nom l'indique, sert uniquement aux messages de pr ésentation des nouveaux membres. Seules les modérateurs peuvent répondre aux fils qui y sont ouverts.   [...]

[Biologie Moléculaire] ARN antisens à partir d'un fragment de gène

2) on utilise une ARN polymérase sur la sonde sens néosynthétisée, en présence de dATP, dGTP, dUTP et dCTP* radioactif, pour synthétiser un brin anti sens complémentaire au brin arn sens, donc identique au brin non codant d'ADN (mais avec U au lieu de T), donc complémentaire au fragment ADN (et le brin anti sens sera marqué radioactivement via dCTP*).  [...] Ce plasmide sera utile car fournisseur de sondes pour des Northern blot (Southern blot pour de l'ARN et non plus de l'ADN) ou de la transcription traduction artificielle comme expliqué ci-dessus.  [...]

[Génétique] Hybridation ADN-ARN !

C'est quoi une hybridation ADN-ARNje sais ce que c'est qu'une hybridation mais comment peut-elle se faire entre l'ADN et l'ARN Serait ce par des simple liaisons hudrogéne ou autre Et c'est quoi le but de tout ça...Merci.  [...] Ensuite, on révèle la sonde (détection de sa radioactivité, activation de sa fluorescence) et l'on peut savoir quelles cellules ont synthétisé l'ARN, donc quelles cellules expriment ce gène.  [...]

Hybridation in situ

La sonde peut s'hybrider de façon aspécifique sur l'ADN. Si l'on ne fait rien alors cette hybridation donne du bruit de fond.Le but du de l'ADN de saumon (on utilise celui ci parce que le saumon pond beaucoup d'oeuf, du coup on peut en avoir beaucoup rapidement) est de capter les hybridations aspécifiques.  [...] Donc si je comprend bien le principe, l'ADN de saumon se fixe sur l'ADN et l'ARN du tissu sur lequel je veux faire l'hybridation in situ, et quand je dépose la ribosonde spécique il y a une compétition entre l'ADN de saumon fixé et la sonde, diminuant ainsi le marquage aspécifique tandisque ma sonde se fixe sur l'ARN que l'on veut mettre en évidence.  [...]

[Biotechnologie] Analyse FISH

Je suis actuellement en train de lire un article et je ne comprends pas la partie me parlant de l'analyse FISH qui permet apparement de mettre en évidence des régions mutées. S'agit il d'une technique semblable au southern blot.   [...] Je crois que c'est pas mal utilisé pour les maladies génétiques dont la même mutation est trés souvent retrouvée ( mucoviscidose..) Mais la technique s'aplique bien aussi à des approches plus fondamentale.   [...]