• Santé - ARN, ADN, Réplication, Plasmide

[Biologie Moléculaire] Régulation de la réplication bactérienne

D'après ce que j'ai lu, la réplication commence si l'ARN II entre dans la bulle de réplication au niveau de l'ori du plasmide et qu'il est clivé par la RNase H. Mais ceci arrive peu fréquemment. Dans la plupart des cas, l'ARN I va s'hybrider à l'ARN II et apparemment Rop (sous forme dimérique) facilite cette hybridation.  [...] Dans le mem registre si tu conaissais des trucs sur la replication plasmidique type rolling circle faisant intervenir DSO et SSO.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN interference

) dont nombreux sont encore à découvrir... On pourrait donc penser que la régulation par ARN antisens serait possible (par ex. bloquer la traduction d'un ARNm par hybridation d'un ARN@sens). mais cela serait également très risqué puisque le rôle @viral du RNAi chez les vertébré a été suplanté par la réponse interféront via PKR.  [...] taper Romby (IBMC, Strasbourg) et CopT sur pubmed) ou encore permettant d'amorcer la réplication du plasmide ColE1... ce sont donc les seuls organismes qui codent pour des ARN @sens, découvert à ce jour.  [...]

[Biochimie] Manipulation de l'ADN: plasmide

L'intérêt est de couper ET notre morceau d'ADN d'intérêt ET le plasmide avec le MÊME enzyme de restriction. Ainsi lorsqu'on les mets en présence l'un de l'autre, ils auront tendance à s'attacher et nous permettre de refermer le plasmide nouvellement constitué.  [...] Le plasmide étant constitué d'ADN tu as besoin d'une origine de réplication afin de permettre aux polymérases de le reproduire dans la bactérie. Si le morceau d'ADN ajouté code pour une protéine, la présence d'un promoteur et d'un terminateur te permettra d'activer la production de la protéine à partir du plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] La molécule mystère - Page 4

Je suis homodimère d'origine bactérienne.Possédant 3 fonctions, je possède en outre deux sites actifs à tyrosine. Mon role dans la réplication d'un ADN a été établis.  [...] Euh, ben là du coup, je suis un peu perdue. l'ADN plasmidique est répliqué par la polymérase de la cellule hôte, la condition à une bonne réplication étant les compatibilités entre son Ori et l'espèce hôte.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

oui ms le plasmide il est capable de réplication autonome c'est pareil pr mon ptit ADN seul ce que je veux dire c'est que si je taggue un ADNc avec de la GFP par ex et que je transfecte tt ca, jvais bien obtenir une protéine tagguée avec la GFP.  [...] Il ne faut pas confondre ADNc (qui est issu de la retro-transcription d'ARN et qui est monocaténaire (simple brin)) et plasmide (ADN circulaire et bicaténaire).  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN antisens à partir d'un fragment de gène

2) on utilise une ARN polymérase sur la sonde sens néosynthétisée, en pr ésence de dATP, dGTP, dUTP et dCTP* radioactif, pour synthétiser un brin anti sens complémentaire au brin arn sens, donc identique au brin non codant d'ADN (mais avec U au lieu de T), donc complémentaire au fragment ADN (et le brin anti sens sera marqué radioactivement via dCTP*).  [...] Ce plasmide sera utile car fournisseur de sondes pour des Northern blot (Southern blot pour de l'ARN et non plus de l'ADN) ou de la transcription traduction artificielle comme expliqué ci-dessus.  [...]

CRISPR Cas9: Fabrication d'ARN en laboratoire

C'est la seule application qui n'est pas de la science-fiction (pour le moment j'entends). Les traitements contre les maladies génétiques et le SIDA n'en sont pas encore aux tests cliniques (du moins autant que je sache).   [...] Petite précision. bien souvent, l'ARN n'est pas produit de manière synthétique, en tout cas pour les applications communes en laboratoire. On a plutôt tendance à encoder sa séquence dans un plasmide (un morceau d'ADN qu'on donnera à la cellule pour qu'elle l'exprime), tout comme on le fait pour la Cas-9.  [...]

Precipitation adn plasmidique

Autre solution tu rajoute a ta culture sur la nuit un peu de chloramphenicol pendant quelques heures. Ca bloque la multiplication des bacteries mais n'affecte pas pas la replication de l'ADN. donc tu augmente la quantité de plasmide dans tes bacteries.  [...] Pour concentrer ton ADN, tu peux éventuellement utiliser un désicateur pour évaporer un peu d'eau de ton produit de purification d'ADN plasmidique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Question purification QIAprep

Si tu ajoutes du Cm ici c'est pour augmenter le nombre de copie du plasmide. J'imagine que tu dois l'ajouter quand tes cellules sont a DO 0.6-1.0 En fait le Cm va inhiber la traduction, du coup les cellules vont arreter de pousser, mais la replication de l'ADN va continuer.  [...] En fait le Cm va inhiber la traduction, du coup les cellules vont arreter de pousser, mais la replication de l'ADN va continuer. Ta DO va donc etre stable, mais la quantite d'ADN et donc de plasmide va augmenter. Du coup tu vas recuperer plus de plasmide tout en utilisant un kit pour une miniprep.  [...]

vecteurs

un vecteur de clonage a pour fonction d'amplifier un bout d'ADN (codant pour un gene la plupart du temps), ca correspond typiquement a un plasmide qui possede les sequences necessaires de selection et de replication.  [...] Tout ceci est tres general et doit etre remis dans le contexte approprie (de quel organisme parle-t'on, quel vecteur (virus, plasmide, phage etc).  [...]