• Santé - Anticorps, Technique, ADN

Vers un diagnostic prénatal fiable et sans risques des trisomies ?

La stratégie proposée consiste à rechercher l'ADN foetal, noyé parmi de grandes quantités d'ADN maternel dans le sang, en tirant profit de sa particularité. la présence de grandes quantités de méthylations. En effet, cette modification de l'ADN, qui permet de moduler l'expression des gènes, peut être recherchée à l'aide d'une technique déjà bien connue, l'immunoprécipitation de la chromatine.  [...] Cette technique permet d'extraire certaines séquences d'ADN à l'aide d' anticorps spécifiques, comme ici, avec des anticorps qui ciblent la 5-méthylcytidine (la base azotée cytidine qui porte la méthylation ), et qui permettent donc d'enrichir l'échantillon en ADN foetal.  [...]

Traitements des données en QPCR

Je fais actuellement de la QPCR après une technique de ChIP (chromatin immunoprecipitation) et je me pose quelques questions sur le traitement de mes données. Je dois en effet comparer l'échantillon sans anticorps (ou normalement il ne doit pas y avoir d'ADN) avec l'échantillon d'ADN immunoprécipité.  [...] Quelqu'un dans mon labo m'a dit de comparer les valeurs quantité d'ADN immunoprécipité sur quantité d'ADN non spécifique dans le tube sans anticorps (Ac/sans Ac) et de calculer des barres d'erreur là dessus. Par contre, cette personne ne normalisait pas par rapport au gène de référence.  [...]

[Biotechnologie] cytométrie de flux/épifluorescence

la cytometrie de flux est une technique qui permet de détecter la taille, la granulosité d'une cellule ainsi que la fluorescence de protéines cellulaires (protéines fluorescentes comme la GFP ou marquées avec un anticorps couplé à un fluorochrome) ou de l'ADN (ex intercalant fluorescent de l'ADN).  [...] Un microscope à épifluorescence est un microscope muni de faisseaux laser, qui permet l'observation d'échantillons tels que des cellules possédant des protéines fluorescentes comme la GFP ou marquées avec un anticorps couplé à un fluorochrome.  [...]

[Biologie Cellulaire] technique de retard sur gel et immunoprécipitation de chromatine

Le ChiP permet de déterminer la séquence d'ADN avec laquelle une protéine ou complexe protéique connu intéragit. C'est de l'IP sauf que là avec l'anticorps on fait tomber une protéine (d'ou la nécessité de connaitre son identité) qui intéragit avec, entre autre, des bouts de chromatine (préalablement digéré).  [...] Alors haha je vais t'aider a y voir plus clair donc comme tu l'as comprise pour le retard sur gel on obtient plus ou moins un retard c'est a dire on peut obtenir seulement un retard resultant de l'interaction avec une protéine mais on peut aussi obtenir aussi un super retard resultant de l'interaction avec une protéine et son anticorps spécifique donc en soit la technique de retard sur gel permet en effet de démontrer une interaction prot/adn mais aussi dans certains cas avec l'utilisation du bon anticorps elle permet de detecter la proteine specifique qui était lié (dans le cas du super retard).  [...]

[Biologie Moléculaire] Un anticorps marqué par un fluorochrome peut-il se fixer à un acide nucléique?

Je débute en bio mol et je me demande si un anticorps n'est pas trop gros pour pouvoir se fixer à un acide nucléique... j'ai entendu parler des puces à ADN mais je ne crois pas qu'il s'agit d'anticorps.  [...] le contact puce-cible entraine donc l'hybridation de la double hélice d'adn, cela peut être mis en evidence par des techniques optique sous eclairage fluorecent ou par radioactivité. Un systeme de marquage via des traceurs fluorescent ayant été realisé prealablement.  [...]

nombre de mitochondrie

J'aimerai compter le nombre de mitochondrie present dans des cellules epitheliales cancereuses Quelle technique utiliser.  [...] A ma connaissance, je connais pas de technique pour dénombrer les mitochondries mais as tu pensé à une coloration spécifique ou encore une technique avec des anticorps.  [...]

Purification des organites cellulaires

Faut-il parler de la détection des organites grâce aux anticorps ( biotine - streptovidine ), d'électrophorèse et de chromatographie, les tris par bille électromagnétique Par ceux qu'il me semble que c'est technique ont plus pour objectif de purifier les protéines.  [...] Peux-on utiliser la technique des anticorps marqué pour détecter plus spécifiquement un organite et donc obtenir une fraction plus purifié suite à une centrifugation.  [...]

Test ELISA ??

Salut, En immulogie j'ai vu la technique d'ELISA ici ca rappelle la méthode ELISA non compétitif appelé la methode indirecte. Je vais te donner le principe que j 'aui vu en immuno. On fixe les antigène sur une microplaque à puits, on ajoute le sérum contenant les anticorps a doser, on veut quantifier les anticorps circulant.  [...] D'autres techniques existent. si le récepteur est effectivement taggé, suivant les propriété de ce marquage, il est possible lorsqu'il y a interaction avec l'anticorps secondaire via le primaire, d'exciter le marqueur du récepteur qui réémet de l'énergie vers l'anticorps II, lui-même couplé à un fluorophore.  [...]

[Biochimie] Comment éliminer un marquage immunocytochimique?

J'ai des cellules fixé et marquée avec des anticorps primaire souris/chèvre et secondaire fluo (488 et 555) pour deux marqueurs membranaires. Je dois les traiter de manière à dénaturer leur ADN (j'ai un protocole impliquant triton et HCl à 1N) pour en marquer des modifications.  [...] Evidement mon anticorps ciblant les modifications est murin, donc je dois trouver une technique pour enlever les anticorps fixés à la membrane.  [...]

Problème de biologie moléculaire

pour un EMSA, il faut une sonde ADN, donc savoir un minimum sur quoi peut s'accrocher votre protéine. Il faut mieux définir votre expérience. Protéine produite + ADN +/- extraits protéiques Vous avez un anticorps contre votre protéine pour faire un super shift et si l'interaction n'est pas directe Dans ce type d'expé, une interaction ne suffit pas pour dire que c'est un FT, de la même façon que l'absence d'interaction ne suffit pas pour dire que ce n'en est pas un.  [...] On aura un ladder pour l'ADN non mélangé à l'extrait nucléaire et un ladder avec une absence d'échelons au niveau de l'interaction protéine/ADN. L'énoncé ne précise pas l'utilisation d'anticorps pour provoquer ce super-shift. Mais c'est envisageable, la question est ouverte.  [...]