• Santé - Anticorps, Recherches, Protéine

[Biologie Cellulaire] Test d'activité des kinases

Pour un Western sur des phosphorylations, il faut posséder des anticorps spécifique de la phosphorylation que tu recherches dans ta protéine. Hors si c'est un site de phosphorylation encore inconnu, aucun anticorps ne sera disponible. En plus il peut y avoir des croisements de reconnaissance.  [...] Donc un essai kinase permet une évaluation plus directe d'une phosphorylation, à condition d'avoir une version Wt et une version mutante inphosphorylable sur le site que tu recherches et/ou que tu veux étudier. C'est assez simple comme expérience. Dans un même tube tu met ta protéine, de l'ATP froid et de l'ATP radiomarqué au 32P, et la kinase phosphorylant ton site d'intérêt.  [...]

[Immunologie] Recherche de modification de proteine par anticorps

j'ai commencé à comprendre que je devais d'abord immunoprécipiter ma proteine avec un Ac spécifique, mais après je n'arrive pas à voir comment révéler la présence de la modification... je peux faire réagir ma proteine avec un Ac spécifique de ma décoration et migrer ma proteine sur gel puis révéler la présence de mon Ac spécifique à ma décoration ça pose pb qu'il y ai 2 Ac au final il ne peut pas y avoir de réactions croisées.  [...] - phosphorylation. il existe des anticorps reconnaissant spécifiquement votre protéine phosphorylée et il existe même parfois plusieurs anticorps différents si la protéine a possède plusieurs sites de phosphorylation. Si il n'existe pas d'anticorps vous pouvez faire une IP contre votre protéine et révéler avec un anti phospho tyrosine ou un anti phospho serine.  [...]

[Immunologie] Faire divorcer un couple Ag-Ac

Pour des immunoprécipitations, tu peux peut-être arriver à trouver des conditions analogues à celles que tu recherches pour ta méthode, dans le cas où les auteurs souhaitent récupérer la protéine immunoprécipitée sans son anticorps, et sans la dénaturer c'est encore mieux.  [...] Tu peux aussi regarder les manips où les auteurs effectuent une purification protéique par chromatogrtaphie d'affinité où la phase stationnaire est constituée de billes couplées à un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt. Généralement, ils utilisent la force ionique pour éluer la protéine.  [...]

[Immunologie] immunoprécipitation

Donc avec 1 anticorps tu va piocher ta protéine. Ensuite tu purifie ton complexe anticorps/protéine et tu va regarder si tu as de l'ADN fixé. soit par PCR (si tu cherche une séquence spécifique) ds la CHIP ou soit directement par autoradiographie.  [...] l'immunoprecipitation te permet de purifier la protéine d'interet parmi toute celles synthetisées. Donc ton anticorps reconnait ta protéine, puis en generale tu utilises la proteine A couplée a des billes de sepharose. La proteine A a la propriete de se fixer aux anticorps, et la bille permet de culoter les complexes par centrifugation.  [...]

[Divers] Protéine purifiée et anticorps

Lors de la préparation des concours pour l'INRA, je bloque sur une question me demandant ce que l'on espère obtenir en injectant une protéine purifiée à un lapin. Je serai tentée de répondre des anticorps monoclonaux, mais je ne vois pas bien la différence entre une protéine dite purifiée et une protéine tout court.  [...] Non, tu as tout un tas d'épitopes dans une protéine. Prenons le cas d'une protéine à multidomaines. tu peux avoir des anticorps dirigés contre la partie C ou N-terminale mais également contre le domaine 1 le domaine 2, etc. Différents lympho sont susceptibles de reconnaitre une partie de ta protéine, et en fonction de leur maturation vont produire des IgG1, 2a, 2b, etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] structure des protéines

Non, une protéine ne réagit qu'avec un anticorps Donc pour réagir avec une protéine, il faut que l'anticorps reconnaisse l'épitope.  [...] Par contres elles ont été immunoprécipitées par des anticorps anti-proinsuline, donc ces protéines possèdent le même épitope que la proinsuline, elles en sont donc très proches. Ce seraient donc des protéines de pré-proinsuline, ce qui collerait car leur PM est plus élevé.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage par Ac-FITC : du solide ?

Après la période d'incubation, j'aurais ajouté un anticorps anti-[protéine récherchée]. puis un second anticorps marqué au FITC et dirigé contre l'anticorps du complexe précédent.  [...] je ne pense pas que tu aies le choix. Quelle est la localisation cellulaire de ta protéine En immuno généralement on fixe les cellules puis on les perméabilise pour donner accès aux anticorps. Autre chose. ce type d'approche n'est que peu quantitatif.  [...]

[Biochimie] anticorps ,

bonsoir tout le monde, je suis à la recherche d'un anticorps spécifique pour la globuline A3, pour détecter cette protéine par western blot, quelqu'un aurait déjà tester des anticorps pour ce type de globulines mon matériel végétale est le blé.  [...] je ne trouve pas de documentation aussi sur la famille des globuline chez blé, je sais qu'il y a deux groupes viciline 7S et légumine 11S.   [...]

[Immunologie] VIH difficultées à trouver un vaccin

Ceci vous justifie d'emblée que les anticorps produits à partir de la protéine native soient inéfficaces et l'intérêt d'en quelque sorte peler la protéine virale. On cherche à atteindre le noyau.  [...] C'est ce qui est décrit dans le document 2 partie 2. On a produit un anticorps contre la région constante en utilisant la protéine sans région hypervariable. Cet anticorps permet la vaccination en touchant toutes les protéines virales dans le court interval de temps où elles se découvrent.  [...]

[Biologie Cellulaire] Co-Immunoprécipitation

5. Tu rajoutes un tampon dénaturant (SDS et b-mercaptoethanol), qui va dissocier et dénaturer les anticorps, libérant ainsi les protéines A et B.  [...] donc que B interagit avec A. Pour controler, tu reincubera la membrane avec un anticorps anti A pour vérifier la présence de la protéine A (sinon cela signifie que ton IP n'a pas marché, donc il est normal que tu ne vois pas B).  [...]