• Santé - Anticorps, Protéine, Sonde

[Biologie Moléculaire] Retard sur gel

En fait on s'assure de la nature de la protéine d'intérêt en étudiant les effets d'un anticorps dirigé contre cette protéine. (dans le cas bien sûr où on a des candidats).  [...] En effet, si le retard qu'on observe est bien spécifique a la protéine d'intérêt, l'incubation avec un anticorps dirigé contre peut avoir deux effets. soit le retard est décalé vers le haut (supershift) du a la taille du complexe, soit le retard disparaît, a cause de l'encombrement produit par l'anticorps dans l'interaction avec la sonde.  [...]

[Biochimie] etude de proteine de liaison à l'ADN

En gros, ta sonde libre va migrer en bas du gel, et en présence d'une interaction avec une protéine, le complexe ADN-protéine sera ralenti dans le gel puisque plus gros. il apparaitra une bande radioactive dite retardée.  [...] Selon les cas, tu peux vérifier quelle protéine interagit avec ton ADN en ajoutant a ton mix ADN+ protéines un anticorps dirigé contre ta protéine d'intéret. Dans ce cas deux solutions.  [...]

Problème de biologie moléculaire

pour un EMSA, il faut une sonde ADN, donc savoir un minimum sur quoi peut s'accrocher votre protéine. Il faut mieux définir votre expérience. Protéine produite + ADN +/- extraits protéiques Vous avez un anticorps contre votre protéine pour faire un super shift et si l'interaction n'est pas directe Dans ce type d'expé, une interaction ne suffit pas pour dire que c'est un FT, de la même façon que l'absence d'interaction ne suffit pas pour dire que ce n'en est pas un.  [...] On aura un ladder pour l'ADN non mélangé à l'extrait nucléaire et un ladder avec une absence d'échelons au niveau de l'interaction protéine/ADN. L'énoncé ne précise pas l'utilisation d'anticorps pour provoquer ce super-shift. Mais c'est envisageable, la question est ouverte.  [...]

[Biologie Cellulaire] Southern Blot, Northern Blot et Western Blot

Ce gel est un peu compliqué à manipuler alors on fait migrer les protéines sur une feuille de nitrocellulose sans perde l'ordre des protéines. Pour finir on ajoute des anticorps qui vont reconnaitre spécifiquement les protéines que tu veux étudier. Ces anticorps sont couplés à une sonde lumineuse, chimique, radioactive.  [...] bref quelque chose qu'on peut mesurer. Plus le signal de l'anticorps est présent plus ta protéine était présente dans ton matériel de base.  [...]

HPLC sur des protéines déjà dénaturées

Je m'explique. J'ai marqué ma protéine avec une sonde fluorescente. Dans le processus, la protéine est dénaturée (c'est voulu). Je souhaite ensuite savoir combien (en pourcentage) de protéines j'ai marqué.  [...] Si ta sonde fluo est bien connue, si tu parviens à éliminer l'excès de sonde de la protéine marquée, et si son absorbance est peu impactée par le greffage (çà fait beaucoup de si.), tu peux determiner approximativement le taux de greffage moyen par spectro UV/vis également https.//tools.lifetechnologies.com/c...-FP-ratios.pdf.  [...]

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

Pas tout à fait. ils ajoutent en fait une sonde qui détecte tout les fragments GST. Cela leur sert de contrôle, et ainsi de vérifier la présence (ou l'absence) de leur protéine. Cela doit également leur permettre de faire une étude semi quantitative (d'où le strong et weak).  [...] Ce sont les noms des protéines. Sur le côté gauche, tu as le nom des protéines interagissant avec les lipides, en haut à gauche, le type de lipide, au milieu la quantification de l'interaction (la séparation fort ou faible vient de se paramètre), à droite la localisation de la protéine dans la membrane cellulaire, si c'est une kinase ou si sa fonctio est inconnu.  [...]

[Biologie Moléculaire] DOT Blot quantitative

tu parles de protéines ou d'acides nucléiques Pour limiter les hybridations non spécifiques, on sature les sites potentiellement capables de lier ta sonde ou ton anticorps, avec des protéines du lait ou de la BSA pour les portéines, avec des polymeres comme le DIDC ou de l'ADN de sperme de saumon ou de hareng pour les acides nucléiques.  [...] Par rapport à l'annalyse des images, il y a de nombreux logiciels, souvent fourni avec le matériel de capture, qui permet de sélectionner manuellement ou automatiquement des zones de dépot, et ensuite d'évaluer des quantités par densitométrie.   [...]

[Biochimie] Destruction des ponts disulfure

Je cherche à détruire (ou oxyder) les ponts disulfure d'un mélange de protéine, et ce d'une façon que je puisse ensuite ajouter ma sonde fluorescente qui reconnait les thiols (extrémité S-H). Et pour compliquer les choses un peu plus, je ne peux pas avoir plus de 2 étapes, ne peut pas chauffer au delà de 50-60°C, et je préférerai que ma sonde fluorescente reste fluorescente. Oui, un vrai challenge.  [...] Autre info. j'utilise également en parallèle une sonde succinimidyl 488 qui reconnait les résidues amines des protéines.  [...]

[Génétique] Retard sur gel

mais l'on voie 2 bandes car. la plus petite bande il n'y a qu'un site fixé par la protéine, la plus grande bande car il ya les 2 protéines fixés.  [...] Perso si c'est possible je verrais 1 la sonde, 2 la sonde + un facteur de transcription, et 3 la sonde + le ft + une protéine couplé au FT.  [...]

[Biochimie] retard sur gel

Pourquoi ne pas essayer avec un extrait protéique contenant votre protéine que vous savez active, et de tenter un supershift ou une inhibition avec un anticorps spécifique.  [...] Rien ne garantit que votre protéine, seule, peut se lier à l'ADN (pour avoir pas mal bossé sur des facteurs de transcription, les complexes protéines-ADN ça peut etre réellement compliqué).  [...]