• Santé - Anticorps, Protéine, Normalisation

[Biochimie] Normalisation de la quantité de protéine Western Blot

Pourriez m'expliquer comment on fait pour normaliser une quantité de protéines lorsqu'on réalise un western blot, je sais qu'il faut utiliser des protéines comme la béta tubuline mais techniquement on fait comment.  [...] Et bien tu utilises un anticorps dirigée contre ta protéine de normalisation comme l'actine, la tubuline, le GAPDH... pour révéler sur la même membrane où tu as révélé ta protéine d'interêt. Si tu as déposé la même quantité de protéine dans les puits, ta protéine contrôle va te permettre de le confirmer visuellement.  [...]

[Biochimie] Petite question sur le Western Blot

D'autre part lorsque tu feras ta normalisation en western tu la feras sur une 3 ème protéine C indépendante de A et de B, et à priori le niveau de C reste constant (c'est le principe d'une protéine de normalisation). Donc en faisant le ration A/C tu devrais avoir une vision réelle de l'effet de ta drogue.  [...] Maintenant si on prend le cas où c'est justement sur la protéine B que tu normalise la protéine A (imaginons que l'actine bouge, comme cela arrive dans certains lignées), tu vas voir une augmentation de B seule et c'est un résultat en soit. ta protéine de normalisation est modulée par ta drogue.  [...]

[Biochimie] Normalisation de la quantité de protéine Western Blot chez E.COLI

[Biochimie] Normalisation de la quantité de protéine Western Blot chez E.COLI.  [...] je voudrai connaitre quelles sont les protéines chez E.coli qu'on utilise pour pouvoir normaliser une protéine d'intérêt (comme l'actine chez les eucaryotes).  [...]

western blot, protéine phosphorylée et protéine totale?

Ensuite t-JNK signifie total-JNK, tu en as besoin pour déterminer une quantité de protéine phosphorylée. On ne peut pas vraiment dire que ce soit un contrôle interne. Si tu étudie la phosphorylation d'une protéine il te faut bien montrer quand tu fais une time course que l'a phosphorylation augmente sinon ça ne veut rien dire.  [...] Finalement GAPDH est lui un contrôle de charge, tu peux faire actine ou tubuline, c'est juste pour montrer que tu as loadé sur ton gel la même quantité de protéine. Ca sert à la normalisation.  [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

...Dans le cas où les deux protéines ont des poids moléculaires suffisamment espacés, on peut couper la membrane entre les deux tailles attendues (grâce au marqueur de taille) et faire l'incubation de chacune des parties avec l'anticorps adéquat. Ou alors, si les deux protéines ont des tailles proches, il y a trop de risque de couper des bandes d'intérêt, donc on peut faire migrer deux gels en parallèle.  [...] un pour la protéine d'intérêt, un pour le témoin de dépôt (actine dans ton cas). Bien entendu, cela n'est pas optimal pour la normalisation par le témoin de dépôt, mais si le dépôt est bien homogène entre les deux gels et que le volume est déposé avec précision, c'est valable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Méthodes de normalisation des microarrays

Je suis un peu perdu dans les différentes méthodes de normalisation des macroarrays. D'une part, je lis que les méthodes de normalisations sont.  [...] D'autre part, dans la litterature on parle des méthodes de normalisation différentes telle que LOWESS, quantile,...etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plan de plaque PCR en temps réel

Pourtant, tu parles de gène de référence pour calculer un facteur de normalisation (comment tu le calcules d'ailleurs ce facteur ).  [...] * 3 gènes de références (lesquels, par curiosité ), afin de calculer un facteur de normalisation (comment tu le calcules, toujours par curiosité ), et donc de pouvoir comparer au sein d'une même plaque, l'expression d'un gène dans tes différents échantillons, en considérant que les 3 gènes de références ne varient pas.  [...]

[Immunologie] Normalisation de données issues d'un séquençage NGS (ARN)

Je suis étudiant et je fais un projet sur le séquençage NGS des ARN. Je dispose du nombre de reads avec la liste d'ARN en lignes et le nom de cellules en colonnes. Je veux normaliser mes données. Notre prof nous demande une normalisation avec GeNorm et NormFinder sous R et je ne sais pas comment m'y prendre.  [...] Le principe de la normalisation des données, c'est qu'au cours du processus d'extraction, purification, RT, etc, tu peux perdre une fraction significative de tes ARNs. Du coup, d'un échantillon à l'autre, les quantités d'ARNs varient totalement. Mais les rapports de concentrations entre gènes (au sein d'un réplicat), ou de gènes de ménages au sein de ton expérience, ne changent pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Génotypage--pcr

jai changé la concentration en amorces fait varié dautres paramètres mais en vain...je pense certaineme,t que le probleme se situe dans le réglage de la normalisation à peine je change mes valeurs,mes résultats sont complètement différent.malheureusement dans mon labo aucune personne n'a les compétences pour régler la normalisation et moi encore moins...je découvre à peine la PCR.  [...] jai changé la concentration en amorces et fait varié dautres paramètres mais en vain...je pense certainement que le probleme se situe dans le réglage de la normalisation à peine je change mes valeurs,mes résultats sont complètement différents.malheureusement dans mon labo aucune personne n'a les compétences pour régler la normalisation et moi encore moins...je découvre à peine la PCR.  [...]

Il n'y a pas 2 sexes déterminés ?

Les personnes aux QI. 140 seraient-elles aussi anormales Dans ce cas je propose qu'on leur injecte des drogues abrutissantes pour les ramener au QI 100 du plus grand nombre. Merci encore pour vos voeux de normalisation mais je suis en parfaite santé et je suis très bien comme je suis car née intersexuée j'ai eu la chance de naitre dans un pays pas trop arriéré en ce domaine et j'ai échappé à l'irréversible mutilation de mon clitoris-pénis.  [...] Le monde médical commence à prendre conscience de ses excès en normalisation sexuelle. Non ce n'est pas la médecine qui doit nous rendre normal mais c'est à la médecine de devenir normale dans ce domaine comme elle l'est devenue sous la pression des forces progressistes à l'égard des homosexuels.  [...]