• Santé - Anticorps, Protéine, Intérêt

[Biologie Cellulaire] Notion de contrôles, contrôles isotypiques, culture cellulaire

Pour moi, il s'agit d'un contrôle permettant la vérification de l'absence de fixation non spécifique d'un anticorps, que l'on effectue en incubant une IgG dirigée contre une protéine jamais exprimée dans la cellule qui nous intéresse. Ainsi, on vérifie l'absence de fixation non spécifique et donc la spécificité du marquage effectué avec l'anticorps dirigé contre la protéine que l'on veut localiser.  [...] Bah si l'anticorps qui cible votre protéine d'intérêt est un IgM, l'anticorps contrôle doit être un IgM. Si il s'agit d'un IgG, le contrôle doit être un IgG.  [...]

[Biologie Cellulaire] Anticorp anti-espece et Western Blot

Dans le western blotting, tu vas effectivement utiliser deux anticorps distincts. L'anticorps dit primaire (que tu as nommé AC1), et l'anticorps qui sera dirigé contre la protéine que tu souhaite mettre en evidence par le western blotting. Cetr anticorps aura été produit par immunisation d'un animal en utilisant la protéine d'intérêt comme antigène.  [...] L'anticorps secondaire (que tu as nommé AC2) est celui qui va te permettre de mettre en évidence la réaction AC1-protéine d'intérêt. cet anticorps (AC2) sera couplé à une molécule qui permettra la révélation (en général l'enzyme HRP, peroxydase de raifort).  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

le pulldown après c'est parce qu'on utilise des billes couplées à des anticorps qui fixent la GST et sa protéine fusionnée, on peut laver puis éluer pour concentrer la protéine d'intérêt.  [...] c'est ça. Le truc c'est qu'il n'existe pas toujours d'anticorps dirigés contre les protéines d'intérêt ou d'anticorps bien spécifiques alors que ceux qui reconnaissent la GST le sont. Il existe aussi des techniques pour récupérer la protéine sans le tag à la fin, par exemple en clonant un site de restriction SapI entre le cDNA de la prot et celui de la GST.  [...]

[Biologie Moléculaire] Retard sur gel

En fait on s'assure de la nature de la protéine d'intérêt en étudiant les effets d'un anticorps dirigé contre cette protéine. (dans le cas bien sûr où on a des candidats).  [...] En effet, si le retard qu'on observe est bien spécifique a la protéine d'intérêt, l'incubation avec un anticorps dirigé contre peut avoir deux effets. soit le retard est décalé vers le haut (supershift) du a la taille du complexe, soit le retard disparaît, a cause de l'encombrement produit par l'anticorps dans l'interaction avec la sonde.  [...]

[Immunologie] immunoprécipitation

Dans la co immuno, tu va piocher avec un 1er anticorps ta 1ere protéine que tu soupçonne d'interagir avec une 2eme protéine. Ensuite a partir de ce complexe Anticorps/protéine que tu as purifié tu va essayer de detecter la 2eme protéine par un Western blot.  [...] l'immunoprecipitation te permet de purifier la protéine d'interet parmi toute celles synthetisées. Donc ton anticorps reconnait ta protéine, puis en generale tu utilises la proteine A couplée a des billes de sepharose. La proteine A a la propriete de se fixer aux anticorps, et la bille permet de culoter les complexes par centrifugation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Cross-reactive protein ?

C'est une proteine qui n'est pas cense reagir avec l'Ac mais qui reagit quand meme. Il y a donc une bande supplementaire en WB.  [...] Vu la figure, c'est une protéine reconnue par l'anticorps mais qui n'est pas la protéine normalement ciblée par l'anticorps (ici PML). Elle présente un épitope proche de l'épitope reconnu par l'anticorps, elle est donc reconnue par celui-ci. Mais PML sort à quelle taille Car habituellement ce genre de précision n'est marqué que dans le cas où la bande non spécifique peut être confondu avec la bande correspondante à la protéine d'intérêt.  [...]

western-blot

je suis entrain de faire des western sur des mutants afin de voir la différence d expression d une protéine dans ces lignees. Or je suis obligé pour cela de précipiter mes protéines sinon je n ai pas les quantites suffisantes.  [...] L'autre solution est d'hybrider ta membrane avec un second anticorps. qui va reconnaitre une protéine témoin (style l'actine si bien sur la taille de ta protéine témoin n'est pas la même que celle de ta protéine d'intérêt).  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutations et Southern Blot

Question 2. quel est l'intérêt d'utiliser des anticorps dirigés contre la partie N tem de la protéine.  [...] - C'est le même problème avec l'exon. si ta sonde est le produit de retrotranscription d'un gène avec exon et que ton gène l'a perdu, peut-on encore détecter un tel gène.   [...]

[Biochimie] Normalisation de la quantité de protéine Western Blot

Et bien tu utilises un anticorps dirigée contre ta protéine de normalisation comme l'actine, la tubuline, le GAPDH... pour révéler sur la même membrane où tu as révélé ta protéine d'interêt. Si tu as déposé la même quantité de protéine dans les puits, ta protéine contrôle va te permettre de le confirmer visuellement.  [...] Même si le western n'est pas une méthode quantitative il est aussi possible de mesurer l'intensité de tes bandes avec un logiciel, et de normaliser ta prot d'interêt par rapport à ta protéine contrôle mais en général on se contente du visuel.  [...]

[Biochimie] Différence western blot / immunoprécipitation

Ensuite on peut mettre la protéine isolée sur un gel d'électrophorèse puis une membrane pour révéler sa présence (ou non) avec un anticorps.  [...] Du coup cette raison me semble valable et j'y avais pensé, c'est mieux d'avoir la seule protéine sur la membrane plutôt que toutes les autres avec, même si l'anticorps n'est censé révéler que la protéine d'intérêt.  [...]