• Santé - Anticorps, Primaires, Espèce

[Immunologie] Marquage immunofluorescence

Oui tu peux utiliser des anticorps primaires isus de la meme espèce à condition de ne pas utiliser des anticorps d'isotypes identiques. exemple.  [...] Rq. on est souvent conduit à faire ceci car beaucoup d'anticorps primaires sont faits chez la souris. sinon effectivement utiliser des sources provenant d'espèces différentes est encore mieux.  [...]

Conservation des anticorps précédent immunofluorescence

Rassure moi. ce sont les dilutions de tes anticorps PRIMAIRES... Pas secondaire j'espère sinon tu dois exploser le bruit de fond.  [...] PRIMAIRE et SECONDAIRE, et pas de bruit de fond. Mes primaires vont de 1/500 pour un anticorps donné mais le max que j'utilise c'est 1/2000. Il s'agit surement d'anticorps très spécifique car j'ai mes structures très bien marquées. Pour le secondaire, j'utilise toujours 1/500 en dilutions quelque soit le primaire =).  [...]

[Immunologie] Problème immunocytochimie deux anticorps primaires rabbit!

Voilà mon souci, j'ai réalisé une immuno en séquentielle avec 2 anticorps primaires anti-rabbit. Et bien évidemment ça n'a pas marché, même en les faisant l'un après l'autre.  [...] Et si oui, peut on réaliser une immuno normale avec primaire anti-rabbit et secondaire, suivi d'une immuno avec un anticorps primaire anti-rabbit marqué au zenon.  [...]

[Biologie Cellulaire] Anticorps primaires

dans mon tp de bio cell, on me demande un protocole pour fabriquer des anticorps primaires et secondaires, est ce que quelqu'un pourrait m'aider.  [...] Voici deux liens qui expliquent bien comment fabriquer des anticorps primaires et secondaires.  [...]

[Biochimie] Western blot incubation Ac I sous sachet scellé

Si vous avez déjà réalisé des western blot sans soucis avec d'autres anticorps primaires nécessitant l'anticorps secondaire utilisé ici, cela provient certainement de la dilution de l'anticorps primaire.  [...] Quelques toutes petites bulles pourquoi pas, mais il faut absolument éviter les grosses bulles qui viendraient se plaquer sur la membrane, ou rendre le contact avec le lait + Anticorps inhomogène sur la membrane.  [...]

[Biologie Moléculaire] BSA et saturation

Maintenant, dans le cas d'ELISA, elle servirait à empêcher les interactions non-spécifiques des anticorps avec les bords des plaques qui sont très hydrophiles. Donc, durant la première étape, tu laisses ton antigène se fixer au fond des plaques. Puis tu ajoutes la BSA afin de combler les espaces vides.  [...] Et ensuite tu ajoutes les anticorps primaires. Ainsi, les anticorps ne peuvent plus se fixer au fond de la plaque via une interaction non-spécifique.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

La membrane est ensuite lavée 2 fois 10 minutes avant de mettre l'anticorps secondaire de singe (TEBU) dirigé contre les chaînes lourdes et légères des anticorps primaires et marqué à la peroxydase. Cet anticorps est dilué 1000 fois dans le même tampon que l'anticorps primaire, cette étape se fait pendant 45 minutes à température ambiante.  [...] Il est basé sur la compétition entre du thromboxane B2 non marqué présent dans le milieu et une quantité fixée de thromboxane marqué à l'iode 125. Il est ajouté un anticorps primaire qui a une haute affinité et spécificité pour le thromboxane B 2. Avec une quantité fixée d'anticorps et de ligand radioactif, la quantité de ligand radioactif lié reconnue par l'anticorps est inversement proportionnelle à la concentration de ligand non marqué additionné.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protocole expérimental

Moi j'aurai d'abord fait le fractionnement cellulaire puis j'aurai mis mon broyat en présence d'anticorps primaires contre NFKB et secondaires contre l'anticorps qui s'est fixé sur NFKB.  [...] Perdu parce que les détergents vont vous embêter ensuite. Sauf si vous voulez les protéines membranaires c'est inutile. Il y a une méthode plus simple, que l'on voit en première année de biologie. Un truc tout bête qui fait exploser les cellules.   [...]

[Biologie Cellulaire] Problème marquage Actin par la Phalloidine

Je réalise marquage de ma protéine d'intérêt avec un anticorps primaire, puis un secondaire couplé au fluorophore.  [...] PS. j'ai déjà éliminé le problème d'interaction avec les anticorps primaires et secondaires.  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunomarquage

L'immunomarquage cellulaire permet de détecter un antigène spécifique (d'origine cellulaire ou microbienne) et éventuellement d'en préciser la localisation subcellulaire au moyen d'anticorps. Ces anticorps primaires peuvent être directement couplés à une molécule rapporteur (iode radioactif, fluorochrome, enzyme ou particules d'or).  [...] Alternativement, ils peuvent être détectés à l'aide d'anticorps secondaires marqués. Ces techniques peuvent être rendues plus sensibles par l'ajout d'étapes supplémentaires d'amplification.  [...]