• Santé - Analyse, Amplification, Hybridation

[Biologie Moléculaire] Southern Blot et Dot Blot

Dans un cours sur la PCR nous avons vu dans le cadre de l'analyse des produits d'amplification que l'on peut utiliser l'hybridation moléculaire avec le Southern Blot et le Dot Blot mais je n'arrive pas bien à cerner la différence entre les deux.  [...] c'est le même principe, sauf qu'en southern tu fais migrer tes échantillons pour les séparer selon leur taille, ensuite tu hybrides avec ta sonde spécifique radioactive. Tu as une information qualitative surtout.   [...]

Le premier bébé-médicament français est né

Une à deux cellules de l'embryon sont analysées au troisième jour après la fécondation in vitro. K. Hardy, Welcome Images, CC by-nc-nd 2.0.  [...] Pour réaliser ces deux vérifications, un ou deux blastomères (cellule embryonnaire) sur un total de six ou huit, sont prélevés par biopsie sur les embryons au troisième jour après la fécondation. Grâce à des outils de biologie moléculaire (par amplification d' ADN ou hybridation fluorescente in situ ), leur contenu génétique est analysé et l'absence des affections suspectées est vérifiée.  [...]

[Microbiologie] analyse de Profil PCR-southern blot-hybridation

[Microbiologie] analyse de Profil PCR-southern blot-hybridation.  [...] je suis entrain de rédigé la partie Résultats dans mon rapport,mais la.. j'ai pas trouvé comment rédigé une analyse de Profil PCR ( j'ai passè 5 échantillons de la souche Aeromonas,juste pour confirmer l'existence de l'ADN à étudier ),je veux savoir comment rédigé une analyse de resultats de profil PCR,PFGE, SOUTHERN BLOT,et l hybridation ADN-ADN.  [...]

[Microbiologie] analyse profil hybridation moléculaire

svp comment je fais une analyse detaillè des resultats de la membrane hybridè avec une sonde 16s,ou d'un gene specifique.  [...] D'autre part, et je vous l'ai déjà dit également, il faut être un peu plus précis et donner un peu plus de contexte à vos questions si vous voulez de l'aide.   [...]

[Biologie Moléculaire] Détection d'une protéine

j'ai ensuite séquencé mes produits d'amplification (amorces dessinées spécifiquement en 5' et 3' de mon insert) pour vérifier que mon insert était correct et surtout entier. Et là, problème ma protéine est tronquée de 4nulcéotides... (sans doute dû à une mauvaise hybridation de mon amorces et donc mauvaise amplification.  [...] Sinon pas le choix, faut refaire le clonage. S' il y a encore des sites de restrictions uniques en 3', il est possible d'y cloner une séquence composée de 2 longs oligos hybridés codant pour une étiquette, mais ca ne me semble pas beaucoup plus simple que de recommencer malheureusement.   [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Donc pour que tu vois tes amorces, faut que t'en aies beaucoup. Même beaucoup trop. Ca peut aussi expliquer tes problèmes d'amplification si les amorces ont été mal designées, ou pas faites en ce sens. Il se peut qu'il y ait des dimérisations, cad qu'elles s'hybrident entre elles.  [...] Dans ce cas, elles ne sont plus dispo pour l'amplification. Ca peut arriver si ta température d'hybridation est trop basse. Tu peux essayer de l'augmenter.  [...]

[Biologie Moléculaire] qrt PCR : gène de référence avec 2 Tm

Concernant la taille, j'aurais peut-être dû lancer un gel. Mais pour moi ça paraissait évident que deux Tm différents sur le même mix de cDNA = deux produits d'amplification différents, donc le gel ne m'aurait rien apporté.  [...] Question plus théorique. pourquoi l'augmentation de la température d'hybridation diminue le risque d'amplification aspécifique (désolé, je ne suis pas à la page en biomol...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

De même, une faible stringence va entraîner une diminution de la spécificité de réaction de PCR et cela aura pour conséquence une amplification non spécifique.  [...] J'ai oublié (mais mes énumérations ne sont pas exhaustives.). si la température d'hybridation des amorces est trop basse ( = stringence diminuée), l'amplification est moins spécifique aussi.  [...]

[Génétique] désignaion d'amorces pour une qpcr

Des amorces dégénérées pour une qPCR Non. Sinon l'efficacité d'amplification dépendra majoritairement de la probabilité d'hybridation de tes amorces et non plus de la quantité d'ADN.  [...] dans la mesure où l'efficacité ne serait pas comparable selon la cible amplifiée, oui. Et attention, une amorce dégénérée est d'autant moins spécifique, c'est à vérifier.   [...]

[Biologie Cellulaire] Le Génie génétique

en cherchant les techniques d'analyse (cytogénétique), je suis tombé sur le FISH (en français. hybridation in-situ par des sondes fluorescentes).  [...] Insiste sur les difficultés techniques (il y en a quasiment à tous les niveaux) et les considérations éthiques (notamment liées à une éventuelle modification des cellules germinales...).   [...]