• Santé - Amorces, Volume, Concentration

[Génétique] Problème de sequençage

l'ADN marche bien dans le séquençage avec d'autres exons, n'empêche que sa concentration ne dépasse pas les 90ng/ul.  [...] Pour les amorces, j'ai pris un volume de 0.16 ul d'une concentration de 10 uM.  [...]

Biologie moléculaire: calcul volume d'amorces

J'ai besoin d'aide. j'ai 2 amorces, une F à une concentration de 2micoM et une amorce R a une concentration de 8microM. Les 2 amorces sont en mélange dans un volume de 0,70microL. Mais je souhaiterai savoir quel est le volume des amorces quand elles sont séparés.  [...] Au départ mes amorces sont bien séparés, chacune dans un tube à une conconcentration de 100 µM. Mais dans mon protocole elles sont en mélange et c'est pour sa que je veux savoir quel volume il faut prendre pour chacune des amorces à 2 µM et à 8 µM.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dilution PCR

oui c'est ca. Ex. ton tube d'amorces est a 10µM, et tu dois avoir une concentration finale de 500nM. Combien en prélèves tu sachant que le volume réactionnel total est de 50 µL.  [...] si la concentration de l'enzyme est de 5U/ul et qu'il me faut 5U pour mon volume total de 50ul je dois mettre 250ul. à quoi correspondent les 250U d'enzyme en volume (ul) c'est dire combien de ul je dois prendre avec la pipette.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mise en solution d'amorces

Disons a 10mM, que vous diluerez au 1000e au moment de l'utiliser pour faire 10µM (ça me parait léger comme concentration d'amorces...).  [...] Généralement quand tu commandes des amorces on te met la quantité sur le tube, et sur les feuilles qui accompagnent ton colis, tu as un récapitulatif des amorces que tu as reçu et dans une des colonnes on te dit quel volume faut rajouter pour avoir une concentration précise (généralement c'est 100µM il me semble).  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification par PCR

Tu peux aussi augmenter ta concentration en MgCl2, mais je suis d'accord avec les autres. A moins que tes amorces viennent d'une publi où cette amplification aspécifique n'était pas indiquée, ce n'est pas un gros problème.  [...] Oui et non. Trop peut aussi favoriser la fixation des amorces sur des zones non spécifiques, pouvant expliquer cette bande de 100pb. Les amorces sont de toute façon toujours en excès (La réaction perd de son efficacité au fil des cycles, autant que ce ne soit pas pour un truc aussi bête que ça) mais il convient de tester différentes concentrations pour être sur de ne pas avoir ce type de problèmes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr 16s ADNr qui présente des hybridations non spécifiques!

je suppose que tu as fait varier la concentration d'amorces Oui c'est possible que ça limite la formation de brins complémentaires en diminuant la concentration, ou que l'intensité des bandes diminuent.  [...] Je vais essayer de diminuer la concentration de mes amorces, actuellement j'utilise une concentration finale de 1 µM dans mon master mix.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gammes pour calcul de l'éfficacité de la RT-qPCR

L'efficacité est propre a un protocole donné, c'est à dire amorces, mix réactionnel et programme d'amplification. La seule façon de calculer l'efficacité d'une PCR est de faire une gamme de concentration en parallèle des échantillons pour chaque couple d'amorces utilisé.  [...] Il faut ensuite calculer la pente de la droite log(concentration) = f(Ct) qui est liée a l'efficacité.  [...]

mix pcr

oui c'est vrai, j'ai essayé d'ajouter un mix à mon extrait de pcr et de relancer, il semble qu'une amplification a eu lieu cette fois ci, j'ai une concentration de 2600ng/µl et un rapport 260/280 de 1.6, cependant j'ai un doute est ce que c'est mon adn qui a été amplifier ou bien c le produit de mes propres amorces.  [...] Tu as probablement raison. Mais vu la concentration élevée, tu peux avant faire une migration du produit PCR sur gel (d'agarose), afin de confirmer la taille (seulement si la taille de ton fragment amplifié est bien supérieur à celle de tes amorces - 5/10 fois minimum).  [...]

[Biologie Moléculaire] Génotypage--pcr

jai changé la concentration en amorces fait varié dautres paramètres mais en vain...je pense certaineme,t que le probleme se situe dans le réglage de la normalisation à peine je change mes valeurs,mes résultats sont complètement différent.malheureusement dans mon labo aucune personne n'a les compétences pour régler la normalisation et moi encore moins...je découvre à peine la PCR.  [...] jai changé la concentration en amorces et fait varié dautres paramètres mais en vain...je pense certainement que le probleme se situe dans le réglage de la normalisation à peine je change mes valeurs,mes résultats sont complètement différents.malheureusement dans mon labo aucune personne n'a les compétences pour régler la normalisation et moi encore moins...je découvre à peine la PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] QPCR, courbe Tm?

Beaucoups de choses peuvent expliquer ca. Ca va des primers pourris, a une annealing trop basse, [sels] trop importante, pas assez de materiel (ARN/cDNA), mauvaise concentration de primers etc.  [...] Sinon, nous avons observé qu'un doublement de la concentration de primer peut influer dans certains cas sur l'efficacité de PCR. Et comme dit plus haut, en fonction des conditions réactionnelles (quantité de matrice, quantité d'amorces, température), cela peut suffire à créer des dimères, mais ce n'est pas systématique pour tous les couples d'amorces/gènes testés.  [...]