• Santé - Amorces, Sens, Séquence

Amplification de séquence

Existe t -il une méthode ou un protocole permettant de trouver précisément la séquence cible à amplifié, de trouver les amorces sens et anti-sens et valider le matching de ces amorces sur la sequence cible.  [...] 2 trouvez des primes dans NCBI primer blast en spécifiant la référence de la séquence (NM_00448.2 dans ce cas), qui vérifie qu'on amplifie bien la cible et aucune autre (avec les bons paramètres de Tm, de taille d'amplicon, etc.).  [...]

[Biologie Moléculaire] Sequençage amorce

Ma question porte sur le sequençage j'aimerai savoir quel était la methode pour bien choisir l'amorce dans une sequence je m'explique.  [...] Pour une PCR il faut 2 amorces l'une sens l'une antisens, mais qu'en est-t'il pour le sequençage Faut-il une sequence complémentaire, sens.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sequencage supplémentaire de quelques centaines de bases

Question con réponse con... Non je rigole il n'y a pas de question bête. Comme dit précédemment tu prends une amorce au début de la séquence déjà connue mais dans l'autre sens.  [...] Nan mais si tu as séquensé dans un sens tu connais maintenant la séquence donc tu peux faire synthétiser une amorce qui te permettra de séquencer dans l'autre sens et donc en amont de tes premières amorces dégénérées.  [...]

Enzyme Taq polymérase et réaction de PCR

J'aurais une question concernant la réaction de PRC. On utilise 2 amorces une sens et une anti-sens pour délimiter la séquence spécifique à amplifier. Chacune des alors s'hybride sur un brin après dénaturation du double brin. Puis L'enzyme Taq polymérase rajoute les désoxynucléotiques complémentaires, mais comment sait-elle quand elle doit s'arrêter.  [...] D'accord, merci pour votre réponse. Est ce que cela veut dire qu'on a toujours la même taille de brin néosynthétisé Les amorces encadrent la séquence à amplifier sur le même brin, ou on utilise les amorces sens et antisens pour les 2 brins ( 1 seule pour chaque brin dans 1 cycle ).  [...]

[Microbiologie] design des amorces sens et anti sens 5' 3' pcr

[Microbiologie] design des amorces sens et anti sens 5' 3' pcr.  [...] s'il vous plaît qui peut me donner les séquences d'amorces sens (forward) et anti sens (reverse) de la séquence d'ADN suivante 5'ATG GGC CGG GGG TAT ATC TCG GCA GCT AAT AAA TTT ATT TAT TCG GCC ATT CGC ATT AAA TTT CGG GCT GAA GAT TAG 3'.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR dégénéré

sur ce principe on peut décider de créer des amorces PCR en partant de la protéine et non de la séquence ADN. on traduit en sens inverse pour passer de la séquence peptidique à la séquence nucléotidique.  [...] mais comme le code génétique permet plusieurs solution on cré des amorces dégénérées. toutes les amorces vont coder pour les mêmes acides aminés mais leurs séquences sont différentes, par un ou plusieurs nt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amorce sens et antisens

En ce qui concerne les amorces sens et antisens, je ne comprend pas pourquoi l'amorce sens est identique à la séquence cible tend dis ce que.  [...] l'amorce antisens et complementaire à la sequence cible pourtant les 2 amorces doivent hybrider avec l'ADN complémentaire pour débuter la réaction PCR.Je ne sais pas est ce que ma question est claire ou non mais lors de la comparaison de mais amorces avec les sequence cibles sur le site NCBI voila ce que j'ai trouvé.  [...]

[Génétique] amorces PCR

je sais qu'il y a 2 amorces qui s'hybrident sur la séquence (une sur le brin sens l'autre sur le brin antisens) mais lorsque on me donne une longue seq d'un gene (500 bases) je ne sais pas où je dois regarder pour placer les amorces ni comment faire pour connaitre la seq des amorces.  [...] Si c'est pour de l'identification, il faut que la séquence des tes amorces soient spécifiques. Mais c'est vraisemblablement pas le cas ici, vu que t'as qu'une séquence.  [...]

[Biologie Moléculaire] Méthode de diagnostic MLPA

Après hybridation parfaite du couple de sondes à la cible et ligature par l'ADN ligase, on réalise une PCR pour quantifier le nb de cibles présentes initialement en utilisant un seul couple d' amorces complémentaires aux séquences universelles notées X et Y.  [...] Ce que je ne comprends pas c'est comment on va pouvoir amplifier une séquence = la sonde, avec 2 amorces qui vont se lier aux 2 extrémités de cette même séquence Il ne faut pas respecter le sens 5'-3' (et donc, une amorce doit être complémentaire à X par exemple, et l'autre doit avoir la même séquence que Y).  [...]

[Biologie Moléculaire] choix des amorces

Je sais qu'aujourd'hui, des sites sur internet permettent de calculer de choisir les amorces les plus adaptées au brin d'ADN qu'on veut dupliquer. Mais j'aimerai connaitre le raisonnement qu'il faut adopter quand on veut prévoir la séquence des amorces sens et anti sens.  [...] Il faut éviter surtout les séquences formant des structures secondaires (genre des tiges boucles). Enfin il faut faire attention a ce que les deux amorces choisies ne s'apparient pas entre elles, ni ailleurs dans le génome/plasmide (donc eviter les longues répétitions monotones de A, ou de C, ou de G, ou de T).  [...]