• Santé - Amorces, Excès, ADN

[Biologie Moléculaire] Explications rapides sur la PCR

On fonctionne avec des nombres pairs d'amorces car il y a deux brins d'une part, ça permet donc de multiplier la vitesse de fabrication de ces amplicons et de plus ça réduit la taille des amplicons, car au fil des cycles de plus en plus d'amplicons seront de la taille déterminée par les amorces.  [...] Je dirais plutôt que les amorces en excès augmentent la probabilité que celles ci s'hybrident avec l'ADN simple brin, et évite ainsi la renaturation de l'ADN en double brin. On met pas l'ADN en excès.  [...]

[Biologie Moléculaire] Différences entre les types de Taq ?

une autre question SVP comment je peux interpréter le gel d'électrophorèse losque la PCR n'a pas marcher c a dire quant je dis qu'il s'agit d'un excès d'amorces ou d'ADN ou mgcl2.  [...] Concernant ta question sur le MgCl2, la concentration est en relation avec le Tm et la force de liaison entre les différentes molécules d'ADN présentes dans ton tube.  [...]

Température d'hybridation et PCR

Maintenant pourquoi on se place 5°c en dessous du Tm pour avoir la température d'hybridation J'y pense maintenant ça doit être un compromis entre une dénaturation suffisante de l'ADN (ou plutôt une renaturation pas trop rapide de l'ADN après l'étape de dénaturation pour permettre l'hybridation aux amorces) et une température suffisamment basse pour permettre l'hybridation (d'où 5° en dessous du Tm). Non.  [...] La denaturation s'effectue a 94°C pour séparer les deux brins d'ADN. Les amorces etant en large exces par rapport a la matrice lors de l'hybridation (a un Tm bas pour etre certains qu'elles s'apparieront) leur hybridation avec la matrice est favorisée.  [...]

[Génétique] Hybridation Génomique Comparative (CGH)

Ma deuxième question.Je ne comprend rien au marquage par fluorescence, déja, comment peut n'y avoir une hybridation égal et donc absence de fluorescence Et ensuite pourquoi fluorescence rouge =Excès d'ADN tests et délétion, Et pourquoi fluorescence rouge=Excès d'ADN Test et amplification(amplification de quoi d'ailleurs).  [...] Alors avant de commencer, juste une précision. je doute que l'on réalise toujours de la CGH sur métaphases à l'heure actuelle, mais de la CGH-array. C'est le même principe mais sur des puces à ADN (jette un oeil si tu ne connais pas et reviens si tu as des questions).  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification par PCR

Bonjour, manifestement il s'agit d'hybridation non spécifique comme vous l'avez dit. Je pense que c'est caractéristique des amorces mises en excès et de petites tailles qui forment des polymères entre elles. Elles migrent donc plus vite ( petites tailles).  [...] Oui et non. Trop peut aussi favoriser la fixation des amorces sur des zones non spécifiques, pouvant expliquer cette bande de 100pb. Les amorces sont de toute façon toujours en excès (La réaction perd de son efficacité au fil des cycles, autant que ce ne soit pas pour un truc aussi bête que ça) mais il convient de tester différentes concentrations pour être sur de ne pas avoir ce type de problèmes.  [...]

[Génétique] PCR, marqueur biologique

2. Hybridation des amorces qui encadrent la région que l'on désire amplifier (région d'environ 1*000 bases). Les amorces sont mises en excès -. 50-60°C.  [...] 3. Extension des amorces de 5'-. 3' via une ADN polymérase thermostable, ce qui permet de synthétiser un nouveau brin d'ADN artificiel qui sera strictement complémentaire du brin qui a servi de matrice -. 72°C.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ADN/ARN

Pourquoi dit-on que, lors d'une hybridation ADN/ARN, si la concentration d'ARN est en excès, la vitesse d'hybridation est identique à celle d'une hybridation ADN/ADN alors que si la concentration d'ADN est en excès la vitesse est 5 fois moins que celle d'une hybridation entre ADN /ADN.  [...]

[Biologie Cellulaire] questions annales

Ma réponse. je ne sais pas du tout comment le présenter, je sais simplement qu'il faut une complémentarité symétrique pour que lors du repliement les bases soit l'une en face de l'autre, mais quels acides aminés choisir il y en a-t-il qui soit plus a même de former ce genre de structure plutôt que d'autres faut-il inventer une succession d'acides aminés sachant pertinemment qu'il ne sont pas présents dans ce 5'UTR en particulier.   [...] Juste une précision pour ta 1e question. les amorces sont utilisées en excés et non pas 2 seulement.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb migration ADNg sur gel

En ce qui concerne les ARN, dans le labo où je suis on prend mille et une précautions pour arriver à les isoler...(utiliser des tubes et cones stériles, traités à l'eau DEPC puis rincés à l'éthanol puis encore à l'eau, ou un kit de purif d'ARN utilisant du mercaptoéthanol pour inactiver les RNases), précautions que je ne prends pas pour l'ADNg, je pense qu'il y a peu de chances que j'isole de l'ARN total et que ce soit cela que je dose.   [...] Dans le cadre d'un projet, nous avons extrait de l'ADN d'un sol avec un kit d'extraction puis nous avons amplifier un gène spécifique à l'aide d'une PCR et enfin nous avons fait migrer les produits de PCR sur gel d'agarose avec plusieurs concentrations.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

A mon avis ton signal correspond à tes amorces non hybridées. Elles apparaissent souvent sur le gel quand elles sont en excès dans la réaction (elles peuvent former des dimères entre elles). En baissant leur quantité tu devrais avoir un signal moins fort.  [...] ça peut venir de tes amorces si tu n'as pas d'amplification avec d'autres échantillons de bonne qualité, elles ne sont peut-être pas spécifiques de ton 28S.  [...]