• Santé - ADN, Protocole, Vecteur

[Biologie Moléculaire] PB ADN dans le puit d'agarose

Je commence mon 1 er clonage, donc pour faire court j'ai coupé mon vecteur avec une enzyme de restriction ApaI, qui devrait le linéariser.  [...] Alors quoi faire, je ne pense pas que ce soit la quantité d'ADN car j'ai refais le même protocole avec un autre vecteur et cela fonctionne.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transcription in-vitro

Je me demandais pourquoi, lors d'une transcription in-vitro, on doit obligatoirement linéariser le vecteur contenant l'ADN d'intérêt. Par exemple j'ai cloné mon ADN dans le vecteur pSFV1 pour le transcrire in-vitro je dois linéariser le vecteur à l'aide de l'enzyme Spe1 dont le site est situé juste avant le promoteur SP6 nécessaire à la transcription.  [...] Puisque mon vecteur c'est de l'ADN double brin, l'ARN polymérase devrait pouvoir se fixer sur le promoteur même si mon vecteur est encore circularisé non.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

oui ms le plasmide il est capable de réplication autonome c'est pareil pr mon ptit ADN seul ce que je veux dire c'est que si je taggue un ADNc avec de la GFP par ex et que je transfecte tt ca, jvais bien obtenir une protéine tagguée avec la GFP.  [...] La diffusion passive d'ADN dans une cellule (sans système de vectorisation) est un processus très peu efficace. On peut le transfecter par des moyens autres qu'avec un vecteur de type lipide cationique (electroporation ou criblage par exemple), mais d'un point de vue technique, un système de vectorisation est indispensable pour transfecter de l'ADN de manière rapide et efficace.  [...]

Probleme d'induction de GST dans bacterie

3. Pour mieux cerner ton problème, tu commences par répéter ton protocole de production en utilisant le vecteur vide au lieu de ta construction. La GST est une protéine très facile à produire donc tu en auras des tonnes si ton protocole est correct. Rend toi au 4 si tu as beaucoup de GST, sinon rend toi au 7.  [...] 7. Si tu n'arrives pas à produire la GST seule, c'est ton protocole de production qui a un problème. Essaie un autre protocole avec le vecteur vide d'abord puis une fois que ça marchera tu essaieras avec ta protéine de fusion.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage dans le pGEM-T easy vector.

Je souhaite ensuite cloner ce produit PCR dans le pGEM-T easy vecteur. J'ai suivi le protocole de ligation en faisant des ratios molaires insert-vecteur de 1.2 et 2.1 ainsi que les contrôles indiqués.  [...] Encore une petite chose par rapport à l'Arc qui est arrivé lors de l'électroporation. Le background control de promega était ok, pas d'Arc. Par contre, LEUR contrôle positif avec les 2 ul de leur ADN à insérer m'a donné un Arc. Je ne comprends pas pourquoi vu que j'ai juste suivi le protocole.  [...]

transgenèse

- Vecteur désarmé. vecteur de gènes auquel on a enlevé son pouvoir pathogène (ex. plasmide de la bactérie Agrobacterium tumefacies dont les gènes de virulence responsables de la galle du collet ont été retirés).  [...] est ce que c'est un vecteur avec des caracteristiques particulières ou est ce que l'on appele vecteur binaire tous les vecteurs de transfert et les caractéristiques varient d'un vecteur à l'autre.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage directionnel

soit un clonage directionnel d'un insert dans un plasmide vecteur, c'est quand l'adn contenant l'insert et l'adn vecteur sont tout les deux digérés par les mêmes enzymes de restriction, et donc le clonage se fait par appariement d'extrémités cohésives, c'est ça.  [...] Le clonage directionnel est un clonage dans lequel le fragment cloné ne peut se cloner que dans un sens (en effet grace a des enzymes de restrictions qui forment des extremités incompatibles). Le clonage non orienté est un clonage dans lequel le fragment peut s'insérer dans les deux sens.   [...]

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

Pouvez vous m'expliquer simplement la façon dont on crée une ribosonde Je ne comprends pas en effet ce que contient le vecteur au départ (de l'ARN ou de l'ADN), pourquoi on l'appelle ribosonde et pas sonde tout court. D'ailleurs, c'est de l'ARN la ribosonde Bref, merci beaucoup d'avance.  [...] Ne pas oublier que la réaction de transcription ne synthétise qu'à partir d'un seul des deux brins de l'ADN. Ne pas se tromper de brin si l'on veux utiliser cette sonde pour un Northern blot.  [...]

vecteur de clonage et d'expression

Un vecteur d'expression contient des régions promotrices et des séquences régulatrices permettant la transcription et la traduction de l'ADN.  [...] Un vecteur de clonage permet uniquement le transport et la multiplication de l'ADN inséré dans une cellule hôte.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séparation d'ADNs

Comment puis-je isoler l'ADN génomique de l'ADN épisomique (genre vecteur transitoire) de cellules en culture En sachant que.  [...] - ce qui m'intéresse c'est l'Adn génomique (l'inverse serait trop simple...).  [...]