• Santé - ADN, Protéines, Intérêt

[Biochimie] etude de proteine de liaison à l'ADN

A priori je dirai immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), dont le principe consisite à fixer la séquence d'ADN à laquelle tu t'intéresse sur des billes d'une colonne de chromato, puis à faire passer dans cette colonne les protéines dont tu suspectes la liaison à la séquence considérée. Après élution, tu récupères la protéines liée.  [...] Selon les cas, tu peux vérifier quelle protéine interagit avec ton ADN en ajoutant a ton mix ADN+ protéines un anticorps dirigé contre ta protéine d'intéret. Dans ce cas deux solutions.  [...]

Premiers cas de maladie de Creutzfeldt-Jakob | Dossier

Schéma d'une bactérie. Les plasmides constitués d'ADN peuvent contenir un gène d'intérêt et permettre l'expression de protéines, comme l'hormone de croissance. DR.  [...] En France, on compte aujourd'hui 119 cas de jeunes ayant été contaminés par des lots d'hormone de croissance. Un procès, d'octobre à novembre 2010, a eu pour but de déterminer les responsabilités imputées aux différents acteurs de la production et de la distribution de l'hormone contaminée.   [...]

[Biologie Moléculaire] Lyse cellulaire

Je voudrais savoir s'il est possible de lyser des cellules pour récupérer par co-IP une protéine liée à un lipide. Parce que forcément la lyse cellulaire va entraîner une rupture des interaction lipides-protéines et donc du complexe que je cherche à récupérer.  [...] non, un crosslinker = un produit qui fait des liaisons covalentes entre tous les trucs qui passent à sa portée. C'est utilisé pour fixer des liaisons labiles le temps de purifier une interaction. Par exemple on l'utilise en ChIP pour fixer les protéines sur l'ADN, avant de lyser les cellules et de récupérer l'ADN lié aux protéines d'intérêt (formaldehyde par exemple).  [...]

[Biochimie] Méthode Cre-Lox : application ?

Les cellules sont transfectées (plasmide) ou transduites (virus). Une fois l'ADN exogène dans le noyau, les parties homologues vont s'intégrer au niveau d'un des deux brins d'ADN du gène d'intérêt par recombinaison homologue (voir les protéines BRCA2, Rad50, Rad51 pour la compréhension de ce processus chez l'Eucaryote supérieur) car elle correspondent précisément aux séquences des parties flanquantes.  [...] La procédure classique consiste à intégrer un site, cribler, puis sur les clones possédant un site Lox, réaliser la deuxième recombinaison avec le deuxième site Lox, cribler et sélectionner le (s) clone (s) qui possèdent les deux sites LoxP. Un séquençage permet de s'assurer de la position des sites, et on peut (doit) faire une PCR avec des amorces spécifiques des deux parties intégrées pour s'assurer qu'on n'a pas d'intégration de sites LoxP ailleurs dans le génome.   [...]

[Biochimie] Quelle est la différence entre ADN et ARN?

De la même façon pourquoi l'ADN a besoin d'une interface ARN pour faire des protéines. Il est a supposer qu'il y a eu complexification d'un système à l'origine plus simple et qu'un véritable intérêt évolutif existe dans cette usine à gaz. Merci.  [...] Le système n'est pas une usine à gaz. Au contraire, il est très subtil. Ce système (ADN-. ARN-. protéine) autorise plusieurs niveaux de régulation. Des régulations de la traductions ont été notées, mais c'est la transcription des gènes qui se trouve très souvent régulée.  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

- Rôle. lors de la lyse cellulaire, les protéases susceptibles de dégrader nos protéines. Pour éviter la dégradation de notre Béta galactosidase, il faut un pH élevé (basique).  [...] on réalise l'Elution des protéines adhérée avec un tampon de pH inférieure au pHi de la beta galactosidase (avec un pH décroissant ) celle est chargée positivement et se décroche du support.  [...]

[Biologie Moléculaire] Principe de la LM-PCR

La LM-PCR est utilisé pour la technique de ChIP on Chip qui a été developpé afin de rechercher les sequences nucléotidiques associées a une protéines d'interet (Facteur de transcription) sur tout le génome. Elle permet d'amplifier les sequences d'ADN intergéniques coimmunoprécipité lors de la ChIP de séquence inconnue.  [...] Tu fait la meme chose avec un autre fluorophore pour l'ADN total non coimmunoprécipté lors de la ChIP et t'hybride le tout sur une puce possédant une banques de séquences intergénique et le tour est jouer.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

Pour cela on clone dans un plasmide l'ADN codant pour la GST et l'ADN codant pour la protéine d'intérêt, de cette sorte les deux protéines sont fusionnées (elles sont accrochées l'une à l'autres).  [...] le pulldown après c'est parce qu'on utilise des billes couplées à des anticorps qui fixent la GST et sa protéine fusionnée, on peut laver puis éluer pour concentrer la protéine d'intérêt.  [...]

extraction ADN

je fait de l'extraction d'ADN avec TE, lysozyme, SDS, isopropanol et éthanol mais j'obtiens un ADN pas très propre (. 1 au spectro). on m'a dit de rajouter une étape avec le chloroforme mais celui nécessite une hotte chimique ce qu'on a pas. je voulais donc savoir par quoi on pourrai le remplacer.  [...] Ton extraction d'ADN, c'est plus par minipreps ou par midipreps, j'ai un protocole un peu alternatif pour faire des minipreps, mais je ne sais pas si c'est ca que tu cherches.  [...]

Pam

étudiant en L3 Biochimie je m'intéresse également au complexe CRISPR/Cas9. J'ai lu plusieurs review et articles pour préparer une présentation et voici quelques informations qui me paraissent utiles.  [...] L'intérêt de cette reconnaissance, c'est qu'elle garantit une grande spécificité, comparé aux autres méthodes dévellopées. méganucléase, TALEN, et Zinc Finger. Ces méthodes se basent sur une reconnaissance Protéine-ADN alors que les CRISPR permettent une reconnaissance ARN-ADN.  [...]