• Santé - ADN, Protéines, Intérêt

[Biochimie] etude de proteine de liaison à l'ADN

A priori je dirai immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), dont le principe consisite à fixer la séquence d'ADN à laquelle tu t'intéresse sur des billes d'une colonne de chromato, puis à faire passer dans cette colonne les protéines dont tu suspectes la liaison à la séquence considérée. Après élution, tu récupères la protéines liée.  [...] Selon les cas, tu peux vérifier quelle protéine interagit avec ton ADN en ajoutant a ton mix ADN+ protéines un anticorps dirigé contre ta protéine d'intéret. Dans ce cas deux solutions.  [...]

Premiers cas de maladie de Creutzfeldt-Jakob | Dossier

Schéma d'une bactérie. Les plasmides constitués d'ADN peuvent contenir un gène d'intérêt et permettre l'expression de protéines, comme l'hormone de croissance. DR.  [...] En France, on compte aujourd'hui 119 cas de jeunes ayant été contaminés par des lots d'hormone de croissance. Un procès, d'octobre à novembre 2010, a eu pour but de déterminer les responsabilités imputées aux différents acteurs de la production et de la distribution de l'hormone contaminée.   [...]

[Biologie Moléculaire] Lyse cellulaire

Je voudrais savoir s'il est possible de lyser des cellules pour récupérer par co-IP une protéine liée à un lipide. Parce que forcément la lyse cellulaire va entraîner une rupture des interaction lipides-protéines et donc du complexe que je cherche à récupérer.  [...] non, un crosslinker = un produit qui fait des liaisons covalentes entre tous les trucs qui passent à sa portée. C'est utilisé pour fixer des liaisons labiles le temps de purifier une interaction. Par exemple on l'utilise en ChIP pour fixer les protéines sur l'ADN, avant de lyser les cellules et de récupérer l'ADN lié aux protéines d'intérêt (formaldehyde par exemple).  [...]

Définition | Colibacille - Escherichia coli - E. coli | Futura Santé

Le colibacille est un bacille ( bactérie en forme de bâtonnet ), Gram négatif (ce que l'on note souvent Gram -). Escherichia coli possède un génome à ADN double brin circulaire de 4,6 millions de paires de bases, qui est entièrement séquencé. Elle se réplique très rapidement à 37°C, toutes les 20 minutes, ce qui permet de multiplier facilement de l' ADN ou des protéines d'intérêt.  [...] La bactérie E. coli est devenue indispensable aux laboratoires. Elle est très facile à transformer en lui ajoutant des morceaux d'ADN que l'on souhaite cloner. Elle permet aussi d'exprimer des protéines en grandes quantités. Mais en plus d'être un outil, E.  [...]

[Biochimie] Quelle est la différence entre ADN et ARN?

De la même façon pourquoi l'ADN a besoin d'une interface ARN pour faire des protéines. Il est a supposer qu'il y a eu complexification d'un système à l'origine plus simple et qu'un véritable intérêt évolutif existe dans cette usine à gaz. Merci.  [...] Le système n'est pas une usine à gaz. Au contraire, il est très subtil. Ce système (ADN-. ARN-. protéine) autorise plusieurs niveaux de régulation. Des régulations de la traductions ont été notées, mais c'est la transcription des gènes qui se trouve très souvent régulée.  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

- Rôle. lors de la lyse cellulaire, les protéases susceptibles de dégrader nos protéines. Pour éviter la dégradation de notre Béta galactosidase, il faut un pH élevé (basique).  [...] on réalise l'Elution des protéines adhérée avec un tampon de pH inférieure au pHi de la beta galactosidase (avec un pH décroissant ) celle est chargée positivement et se décroche du support.  [...]

[Biologie Moléculaire] Principe de la LM-PCR

La LM-PCR est utilisé pour la technique de ChIP on Chip qui a été developpé afin de rechercher les sequences nucléotidiques associées a une protéines d'interet (Facteur de transcription) sur tout le génome. Elle permet d'amplifier les sequences d'ADN intergéniques coimmunoprécipité lors de la ChIP de séquence inconnue.  [...] Tu fait la meme chose avec un autre fluorophore pour l'ADN total non coimmunoprécipté lors de la ChIP et t'hybride le tout sur une puce possédant une banques de séquences intergénique et le tour est jouer.  [...]

Définition | Plasmide | Futura Santé

Dans la nature, les plasmides sont des morceaux d' ADN qui peuvent se transmettre par transfert horizontal, de cellule en cellule. S'il porte un gène d'intérêt ( résistance à un antibiotique par exemple), c'est un avantage certain pour les cellules qui le possèdent.  [...] Les chercheurs utilisent les plasmides pour y insérer un fragment d'ADN d'intérêt, grâce aux cassettes de clonage. Ils peuvent ainsi cloner des gènes, afin d'exprimer les protéines ou les ARN et les analyser.  [...]

[Biochimie] Méthode Cre-Lox : application ?

On insère les sites LoxP de part et d'autre du gène d'intérêt par recombinaison homologue. C'est à dire qu'on prend la séquence des parties flanquants le gène, pour chacune d'elles, on y ajoute le site LoxP. Chaque séquence modifiée (une par partie flanquante) est intégrée dans un vecteur (plasmide ou virus).  [...] Les cellules sont transfectées (plasmide) ou transduites (virus). Une fois l'ADN exogène dans le noyau, les parties homologues vont s'intégrer au niveau d'un des deux brins d'ADN du gène d'intérêt par recombinaison homologue (voir les protéines BRCA2, Rad50, Rad51 pour la compréhension de ce processus chez l'Eucaryote supérieur) car elle correspondent précisément aux séquences des parties flanquantes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

Pour cela on clone dans un plasmide l'ADN codant pour la GST et l'ADN codant pour la protéine d'intérêt, de cette sorte les deux protéines sont fusionnées (elles sont accrochées l'une à l'autres).  [...] c'est ça. Le truc c'est qu'il n'existe pas toujours d'anticorps dirigés contre les protéines d'intérêt ou d'anticorps bien spécifiques alors que ceux qui reconnaissent la GST le sont. Il existe aussi des techniques pour récupérer la protéine sans le tag à la fin, par exemple en clonant un site de restriction SapI entre le cDNA de la prot et celui de la GST.  [...]