• Santé - ADN, Protéine, Intérêt

[Biologie Moléculaire] Vecteurs d'expression

l'intérêt de mettre le fragment d'ADN dans le même sens qu'un promoteur est très certainement de permettre une transcription/traduction dans le cas ou l'on souhaite produire une protéine.  [...] D'après ce que j'ai compris de ton propos, l'ADN cloné en orientation inverse serait un contrôle négatif, car le vecteur correspondant ne permettrait pas l'expression de la protéine d'intérêt (en faisant que l'hypothèse que ton fragment d'ADN initial contienne une phase ouverte de lecture, un codon stop, etc.  [...]

[Biochimie] etude de proteine de liaison à l'ADN

En gros, ta sonde libre va migrer en bas du gel, et en présence d'une interaction avec une protéine, le complexe ADN-protéine sera ralenti dans le gel puisque plus gros. il apparaitra une bande radioactive dite retardée.  [...] Selon les cas, tu peux vérifier quelle protéine interagit avec ton ADN en ajoutant a ton mix ADN+ protéines un anticorps dirigé contre ta protéine d'intéret. Dans ce cas deux solutions.  [...]

Dominant Négatif

Donc je voulais savoir comment on obtient une cellulle avec une protéine dominant négatif, en modifiant l'ADN dans le génome, ou en transfectant avec un ADN ou un ARN muté.  [...] Par tranfection d'ADN mutee en general ou microinjection de proteine ou ARN. La modification du genome reste nettement plus delicate et quitte a inactiver la fonction d'une proteine autant enlever carrement le gene d'interet.  [...]

[Biologie Moléculaire] Traduction de l'ADN

j'ai touvé dans une etude que de l'ADN transmis a une cellule donnée par methode de biolistique transgenese vegetale s'exprimé meme s'il se trouve au niveau du cytoplasme alors qu'on sait qu'un ADN ne peut se traduire en proteine que si il est transcrit au niveau du noyau la ou il y a l'RNA polymerase.  [...] Je ne sais absolument pas si c'est possible, mais je crois que le rôle de l'ARNm est juste celui d'une copie de travail, ce qui permet par exemple une amplification de l'expression d'un gène par la synthèse de plusieurs ARNm (qui donc donneront plusieurs protéines après traduction). Il ne sert que d'intermédiaire.  [...]

Pam

étudiant en L3 Biochimie je m'intéresse également au complexe CRISPR/Cas9. J'ai lu plusieurs review et articles pour préparer une présentation et voici quelques informations qui me paraissent utiles.  [...] L'intérêt de cette reconnaissance, c'est qu'elle garantit une grande spécificité, comparé aux autres méthodes dévellopées. méganucléase, TALEN, et Zinc Finger. Ces méthodes se basent sur une reconnaissance Protéine-ADN alors que les CRISPR permettent une reconnaissance ARN-ADN.  [...]

précipitation proteine

J'ai vu dans bcp de papier, que pour purifier une RNA polymerase, il fallait aprés lyse des cellules faire une précipitation à la polymin-P suivie d'une précipitation au sulfate d'amonium. Je me suis un peu renseigné et la polymin-P (Polyethylenimine) me semble surtout capable de precipiter les ADNs.   [...] a ceux que ca interesse, la polymin-P permet de detruire les membranes des gram-. Elle permet aussi de precipiter les ADNs et tout ce qui est fixé dessus et donc dans mon cas, la RNA pol vu qu'elle n'existe pas ou trés peu libre dans la cellule.  [...]

[Biologie Cellulaire] question sur les séquences consensus

Par exemple. les sites de fixation d'une protéine. Si il est établie qu'une protéine peut se fixer sur plusieurs séquences d'ADN différentes mais proches, il est possible d'écrire une séquence type. Ainsi, si l'on veut savoir si nos séquences d'intérêt possède le site de fixation pour cette protéine, c'est une séquence consensus que l'on cherche.  [...] Xylem, la séquence dite Shine-Dalgarno est un motif ARN reconnu par l'ARN16s du ribosome chez les procaryotes. Elle participe donc à l'initiation de la TRADUCTION pour de nombreux gènes bactériens.   [...]

Origine de l'origine

J'ai une question a propos de la synthèse des protéine qui me tarraude depuis quelque temps et qui est peut etre sans interet apparent, mais je n'arrive pas à y répondre. VOila. On sait que L'ARN-polymérase est une enzyme (donc une protéine) essentielle a la réplication de l'ADN pour donner 1 ARNm ( c'est très shématique).  [...] Mon problème est de savoir comment se sont synthétisé les premières protéines puisque il n'y avait pas par définition d'ARN-polymérase puisque il ne pouvait etre synthétisé.  [...]

[Biologie Moléculaire] La molécule mystère - Page 9

Bonjoru alors voila je propose une protéine qui a été identifiée par la méthode de screening par yeast two-hybrid. Il s'agit d'un membre atypique de sa superfamille car ne possedant pas de site de fixation a l'ADN mais un domaine putatif fixant un ligand. Cette protéine est exprimée plutot de facon ubiquiste mais présente un grand intérêt pour des avancées vous concernant vous les mecs.  [...] Un autre indice. la sécurine est en aval dans le spindle checkpoint (en tout cas sa dégradation découle de l'inactivation du spindle checkpoint), ma protéine est quasiment en amont.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

Pour cela on clone dans un plasmide l'ADN codant pour la GST et l'ADN codant pour la protéine d'intérêt, de cette sorte les deux protéines sont fusionnées (elles sont accrochées l'une à l'autres).  [...] Pour la séparation de la GST fusionnée à la protéine d'intérêt, c'est peut-être à la digestion à la protéase de pré-scission (PSP (non pas la console ), au facteur Xa ou à la thrombine que tu fais référence.  [...]