• Santé - ADN, Préparation, ARN

Mélanomes

c'est pour cela que dans une preparation d'ADN/ARN le rapport A260/A280 nous donne le taux de puretee de la prep. Si le rapport = 1.8 alors il n'y a pas ou tres peu de protéines. Si le taux chute, cela est du a la presence de protéines.  [...] Merci pour ces informations interessantes. En tout cas c'est la maniere la plus precise de quantifier la puretee d'une preparation d'ADN/ARN de faire le rapport des absorbances a 260/280.  [...]

Hybridation in situ

J'ai une question concernant l'hybridation in situ et je ne trouve pas de réponse. Voilà. dans mon protocole, je fais une préhybridation avec un tampon contenant de l'ADN de sperme de saumon, du formamide désionisé et du SSC 20X. Je sais que cette préhybridation permet de réduire le bruit de fond mais j'aimerai savoir comment ça fonctionne exactement, quel est le rôle de chaque produits utilisé.  [...] Donc tu déplace le bruit de fond vers l'ADN de saumon. Et comme tu vas éliminer cet ADN tu diminues le bruit de fond de ta préparation. L'interet de l'ADN de saumon est de diminuer le signal nucléaire de tes préparation (hybridation ADN/ARN). Ca reste très théorique et dans la pratique je ne le fais pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

Ton prof voulait probablement dire qu'a l'issue d'une reverse-transcription (RT) suivie de PCR. si le résultat est négatif, a priori c'est qu'il n'y a pas d'ARN et il est positif que s'il y en a (sous réserve d'un contrôle ou l'on amplifie l'échantillon sans passer par RT, pour vérifier l'absence d'ADN dans la préparation avant la RT).  [...] Malheureusement les enzymes utilisées en PCR ne sont pas capables de prendre comme matrice un brin d'ARN. La solution est donc d'utiliser une enzyme qui synthétise un brin d'ADN complémentaire de ton ARN, ce brin pouvant ensuite etre utilisé comme matrice pour l'amplification.  [...]

Amorce RT-qPCR exon exon

Quand tu fais une RT-PCR, tu ne veux amplifier que des séquences de cDNA. Pour éviter d'amplifier avec les mêmes primers la séquence génomique de ton gène en même temps que le cDNA (parce que tu risques toujours d'avoir un peu d'ADN génomique dans ta préparation d'ARN puis de cDNA), il faut que tu t'assures que ta PCR ne le permet pas.  [...] 4. si tu n'as qu'un seul exon tu n'as pas le choix. tu fais des primers dans cet exon et tu espères avoir bien éliminé l'ADN génomique (traitement a la DNAse pendant la purification des ARNm). Tu peux en plus faire un couple de primers qui te donnera un produit de même taille mais avec l'un des primers hors du gène, qui te servira de contrôle négatif.  [...]

[Biologie Moléculaire] replication d'ADN

oui bien sure qu'on synthétise les amorces d'ARN à partir d'ARN polymerase mais est ce au moment de la réplication je veux dire est-ce que ces amorces n'ont pas eté présentes avant la replication et elles ne les reste que s'ybrider.  [...] Je crois qu'on a un système complexe de facteurs de réplication qui se met en place, avec le recrutement de la polymérase entre autres. Et je crois que c'est durant cette préparation. Ensuite durant la réplication, on a bien des ARN polymérase qui entrent en jeux, mais je pense que ça doit être suffisamment rapide, quasi-instantannée, pour éviter que l'ADN ne se fasse catalyser par des enzymes DNAse.  [...]

génétique moléculaire

En effet, quand on veut synthétiser des ADNc au labo, on part généralement d'une préparation d'ARN.  [...] On peut aussi partir d'une préparation d'ADN mais dans ce cas, il faut réaliser une transcription in vitro, ce qui est assez lourd techniquement.  [...]

[Biologie Cellulaire] Reverse transcription et amorçage avec hexamères aléatoires ?

L'amorçage aléatoire est très utilisé du fait de sa polyvalence. Il est recommandé pour la synthèse d'ADNc à partir d'ARNm fragmentés, d'ARN riches en structures secondaires, ou lorsque l'on souhaite amplifier plusieurs cibles à partir de la même préparation d'ADNc.  [...] La spécificité de cette enzyme vien du fait qu'elle reconnait sur l'ARN un ribonucléoside, et qu'elle peut catalyser (du fait de sa structure spatial ou, d'un point de vu énergétique, du fait des énergies d'activations qu'elle peut décomposer) la formation d'une liaison phosphodieter entre un dXTP et le fragement d'ADN en cours de synthèse.  [...]

[Biotechnologie] ADNc

L'ADNc est utilisé essentiellement pour la préparation de banque d'ADNc, constituée à partir d'ADN complémentaire (qui est obtenu par transcription inverse de l'ARNm d'un organe, d'un tissu ou de cellules en culture).  [...] J'en ai une petite dernière. Qu'est-ce qui serais gênant dans le fait de réaliser une amplification de gène spécifique par PCR si l'on partait d'ADN chromosomique Pourquoi doit-on passer par l'ADNc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mesure de pureté d'une préparation d'ADN aberrante?

J'avais pensé à une contamination par autre chose que des protéines, mais je vois mal ce qui a pu contaminer en absorbant à 260 pile, et ni à 280 ni à 320. Et surtout qu'est-ce qui peut contaminer mon ADN, à part des protéines Des restes de la lyse des hépatocytes Un truc de la solution tampon.  [...] C'est le premier TP où on prépare nous même de l'ADN, d'habitude il nous est donné tout prêt, donc une mauvaise manipulation est plus que probable en effet.  [...]

[Biologie Moléculaire] les puces à ADN

lors de la préparation d'une puce, il est noté que les ADNc (obtenu à partir des ARNm sont marqués, un en rouge et l'autre en vert )dont on veut comparer l'expression sont mélangés et placés sur la matrice d'ADN simple brin déposée (la sonde).  [...] b) Le puits est vert. L'ARNm n'est exprimé que dans les cellules saines. Le gène correspondant est donc inhibé (voir absent car il n'est pas apparu par mutation) dans la cellule cancéreuse.   [...]