• Santé - ADN, Plasmide, Coupe

[Biologie Moléculaire] Quelques questions ??

3-si par exemple on coupe un plasmide par Bamh1 et on insere une sequence d'adn. Comment peut on verifier la presence de ce fragment ajoute dans le plasmide.  [...] Une Enzymes de restriction est une endonucléases d'origine bactérienne capables de cliver l'ADN double brin en des sites spécifiques.  [...]

plasmide-clonage

En les faisant pousser sur milieu complet + ampiciline, seul les bactéries avec le gène de résistance contenu dans le plasmide survivront.  [...] Ton gène ou fragment d'ADN que tu désires cloner est inséré dans le plasmide grace à un polylinker qui coupe le gène de la bétagalactosidase (bgz).  [...]

[Génétique] Question qui me tracasse beaucoup ( information génétique )

Parce que imaginons qu'on coupe une séquence ( TAAGCG ) du plasmide on prendra une séquence de l'ADN étranger mais qui a les même bases azotées pour qu'elle soit complémentaire avec l'autre brin du plasmide parce que si on prendre d'autres bases, il n'y aura pas complémentarité ( G avec C, T avec A ).  [...] C'est vrai que si tu ouvre un plasmide pour le refermer ca ne sert à rien. Quand on ne fait ca ce n'est que le gène qui va par la suite pouvoir être multiplié de facon exponentielle (division cellulaire) par des bactéries qui nous intéresse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide ligature

Le mieux pour répondre a ce genre de question c'est de faire le schéma de ton insert digéré, (ce a quoi il est censé ressembler après coupure) et pareil pour ton plasmide.  [...] ce qui m'étonne c'est que tu coupe ton ADN avec une enzyme et ton plasmide avec une autre. Normalement les bouts collants ne peuvent pas se linéariser comme cela.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment design des amorces PCR..

2. J'ai un petit problème avec un exo, et ça s'annonce comme ça. On a un ADN double brin coupé par BamH1 (le site en 5' est juste avant l'ATG, celui en 3' juste après le STOP) et on veut l'insérer dans un plasmide digéré par Sma1, on a les sites. BamH1 G/GATCC & Sma1 CCC/GGG.  [...] Bah oui justement le site de restriction je dois le mettre au début de mes amorces pour pouvoir l'insérer ensuite dans le plasmide de la bactérie digérée par BamH1 et Sma1. Mais je sais pas s'il faut compter les nucléotides (qui font donc partie de l'amorce.  [...]

[Génétique] Intégration ADNc

je ne comprends pas pourquoi le fait d'utiliser deux enzymes de restriction lorsque l'on veut insérer un ADNc dans un plasmide permet de contrôler le sens d'intégration de cet ADNc.  [...] Maintenant si tu coupes les deux bouts avec la même enzyme, tu auras des deux côtés les mêmes sites donc ton brin pourra s'insérer dans n'importe quel sens. En coupant avec deux enzymes, on a un site spécifique pour chacun des bouts, on peut donc décider dans quel sens sera intégré le morceau d'ADN dans le plasmide.  [...]

[Biochimie] Restriction bizarre

Combiend e site de coupe a le plasmide pour chaque enzime je pense a 2 pour BGIII au vu des résultas dans les pistes 2 et auncun pour PVUII (vu que le plasmide migre a la meme hauteur que le plasmide mon pote sans digestion) Cela voudrtait dire que les bandes dans les pistes 2 et 3 correspondent au plasmide linéarisé mais pourquoi n'ont -ils pas migré à la meme hauteur.  [...] Commençons par le début. Lorsque tu purifies un plasmide, tu peux être amené à observer trois formes différentes de cette même molécule, qui migrent à des vitesses différentes. une forme superenroulée, une forme circulaire relâchée (dans laquelle un des brin est coupé), et une forme linéaire, ou les deux brins sont coupés.  [...]

[Biologie Moléculaire] PB ADN dans le puit d'agarose

Je commence mon 1 er clonage, donc pour faire court j'ai coupé mon vecteur avec une enzyme de restriction ApaI, qui devrait le linéariser.  [...] Après digestion, j'ai fais migrer mon plasmide coupé versus le non coupé et j'obtiens bien les 3 formes du plasmide non coupé, mais par contre mon plasmide coupé avec ApaI est resté dans le puit, j'ai refais la digestion est même chose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Topo 1 et Topo 2 !!

Lors de la duplication du matériel génétique il se produit des phénomènes de torsions de l'ADN en aval de la fourche de réplication (processus physique lié à la structure de l'ADN). Pour éviter que l'ADN ne casse suite à ces contraintes physiques, la topoisomérase coupe un brin de l'ADN (activité hélicase) et le re-ligue ensuite (activité ligase).  [...] Pour faire simple les topoisomérases sont des enzymes permettant la dénaturation des super enroulements de l'ADN pour y permettre l'acces au materiel de réplication. pour ce faire il me semble que la topo 1 coupe un seul des 2 brins et défait les supertours négatifs sans énergie nécessaire et la topo 2 coupe les 2 brins d'ADN et défait les supertours négatifs et positifs avec consomation d'ATP.  [...]

Qu'est-ce qu'une cellule érythroïde ?

Une cellule érytroïde c'est une cellule de l lignée érythrocytaire c'est à dire une cellule qui va donner un globule rouge (=hématie= érytrocyte).   [...] Par contre, pour la DNase, ce que je me demandais c'est justement dans quelles conditions elle coupe l'ADN, mais l'on m'a dit qu'elle intervenait pour synthétiser le deuxième brin d'ADN dans la chromatine. Est-ce que c'est le cas.  [...]