• Santé - ADN, Plasmide, Cellules, Expression

[Génétique] Tale nuclease

Bonjour, je voudrais savoir svp si quelqu'un aurais déjà entendu parler des TALENS ces des enzymes artificielles qui provoquent des cassures double brin de l'ADN je souhaite savoir si en les transfectant grce à un plasmide dans une cellules eucaryotes il faut que ce gène s'intègre a l'ADN de la cellules eucaryotes ou une simple expression transitoire suffit, Merci bcp d'avance.  [...]

Pureté de l'ADN / efficacité d'expression

J'utilise un protocole de transfection par électroporation sur des cellules HEK293/COS-7, à l'aide d'ADN plasmidiques obtenus de maxi-preps. Le rapport A260/A280 est rarement de 1,8 (l'idéal), plus souvent autour de 1,6 - 1,7.  [...] pour ce qui est de la pureté de ton ADN pour les transfections, si tu tourne autour de 1,6-1,7 c'est vraiment bien. Pour être honnête, moi j'avais une prép de plasmide qui tournait plutôt autour des 1,4-1,5 et mes transfections sur cellules marchaient très bien, y compris le taux d'expression de la protéine qui convenait pour mon type de manip.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

Pour produire cette proteine de fusion dans les cellules de souris, il faut donc assembler un ADN recombinant puis de l'insérer dans un plasmide (ou vecteur ) d'expression permettant la transcription puis la traduction dans les cellules. Au préalable, afin de disposer de suffisamment de vecteur pour les cellules de souris, il est necessaire d'amplifier le vecteur dans le collibacille.  [...] On me demande de présenter les caractéristique generales de ce type de vecteur pour permettre son amplification dans le colibacille puis l'expression de notre proteine recombinante dans les cellules de souris.  [...]

besoin d info sur la transfo des levure au PEG

L acetate de Lithium agit en permeabilisant la menbrane afin de faciliter l entree du plasmide. Le plasmide est melangé avec un ADN entraineur (carrier) qui facilite egalement l entree du plasmide. Les Peg par sa viscosite garde les cellules encontact avec l adn et facilite l adsorption.  [...] Le choc thermique entraine l entree du plawsmide dans la cellule. Certains marqueurs de selction sur les plasmides necessitent un temps de recuperation avant de les etaler sur milieux selectifs. Voila j espere que ca a pu t aider.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transduction/transfection

C'est une question interéssante et j'avoue que je ne suis pas sûre de moi mais je n'avais pas la même idée que toi, pour moi la différence ne réside pas dans une expression stable ou prolongée. Pour moi, la transfection c'est utiliser des méthodes chimiques ou physiques pour introduire ton plasmide, comme des liposomes, ce qui n'empêche pas de distinguer une transfection stable et transitoire.  [...] J'aurais du coup une autre question. la lipofectamine permettant juste l'entrée, il faut que le plasmide en question puisse s'intégrer dans l'ADN de la cellule si on veut une expression permanante. Je sais que la lignée que j'ai, exprimant un canal dans le plasmide pCIneo (promega), exprime de façon permanente cette molécule.  [...]

Le virus : un être vivant ? - Page 2

Mais l'ADN de cellules mortes peut durer très longtemps, même s'il se dégrade. il se coupe en petits morceaux... Au passage, est-ce que l'adénosine mono-phosphate est de l'ARN (En d'autres termes quel est le minimum de monomères pour faire un ARN ou un ADN, un seul (AMP par exemple), deux trois).  [...] Le virus possède par le hasard de l'évolution des éléments permettant que son adn soit répliqué par une autre cellule. Mais nous pouvons réaliser artificiellement ce phénomène, on transforme des cellules avec un plasmide et le tour est joué. Le plasmide est vivant. non.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression d'un gène d'enzyme !

un viel homme a isolé une petite quantité d'attractase,une enzyme produisant une phéromone humaine puissante,à partir d'echantillon de cheveux de célébrités hollywoodiennes.Pour produire de l'attractase à son usage personnel,il a obtenu un clone génomique complet du gène de l'attractase,l'a connecté à un promoteur bactérien puissant dans un plasmide d'expression et a introduit le plasmide dans des cellules d'E coli.  [...] il a été anéanti de découvrir qu'aucune attractase n'etait produite par les cellules.Quelle est 'explication de son echec.  [...]

les Virus?

On transfecte les cellules avec le plasmide (ADN nu donc), je ne suis pas sûre à 100% du mode d'entrée d'ADN nu, donc je laisserai quelqu'un d'autre préciser l'entrée dans la cellule.  [...] Comme les viroïdes ne fabriquent aucune protéine, il est difficile de voir comment ils affectent la cellule-hôte. L'hypothèse la plus probable est qu'ils perturbent l'expression normale des gènes au niveau des ARN messagers, ce qui affecterait tout le métabolisme cellulaire.  [...]

Expression brainbow après recombinaison CRE-LOX dans embryons de souris.

-le temps nécessaire après recombinaison pour exprimer les protéines fluorescente (ils se placent à des temps variables par exemple 79 jours après injection à P0, mais ils ne disent pas qu'on ne peut pas le faire avant). Dans un autre papier Overexpression of growth-associated proteins in the neurons of adult transgenic mice.  [...] Si vous infectez vos neurones avec un retro ou un lenti, vous aurez même la chance d'avoir une expression théoriquement infinie, grâce à l'intégration de l'ADN apporté, contrairement à un plasmide qui resterait épisomal.  [...]

[Biologie Moléculaire] D'une protéine à un gène à une protéine

Ensuite, si tu as besoin de modifications post-traductionnelles (glycosylation, formation de ponts disulfure) tu peux mettre ce gène dans un plasmide d'expression eucaryotique, et faire de l'expression dans des cellules CHO, par exemple.  [...] Et ils optimisent les codons pour l'expression dans l'hôte choisi, ils optimisent les séquences pour la stabilité des mRNA, et on peut leur imposer des sites de restrictions dans le gène (pratique pour faire des cassettes)... Si on leur donne le plasmide d'expression, ils font même le clonage (mais il y a un surcoût de quelques centaines d'euros).  [...]