• Santé - ADN, Membrane, Nylon, Interface

[Biologie Moléculaire] Réalisation d'un Southern Blot

Le SDS joue entre autres le role d'un agent mouillant qui va permettre aux differents constituants du tampon (de préhybridation, d'hybridation) d'atteindre la membrane. Dans un Southern blot l'hybridation entre la cible et la sonde n'est pas libre comme dans une solution car l'ADN cible est fixée à la membrane de nylon et il y a une interaction complexe à l'interface entre une membrane solide et un liquide.  [...] Pour imager un peu, le SDS est un savon, et on lave mieux avec du savon que sans. et comme le nylon chargé positivement des membranes n'est pas forcement très hydrophyle, il permet aussi de mieux réaliser l'interface entre ADN/Membrane et la solution.  [...]

[Biologie Moléculaire] Northern blot

Je me demandais pourquoi est-ce qu'on utilisait en membrane en NYLON Je ne comprends pas.  [...] les acides nucleiques sont charges negativement via les groupes phosphates, du coup ca va creer une interraction et faciliter le transfert/fixer les AN.   [...]

[Biologie Moléculaire] Un anticorps marqué par un fluorochrome peut-il se fixer à un acide nucléique?

Je débute en bio mol et je me demande si un anticorps n'est pas trop gros pour pouvoir se fixer à un acide nucléique... j'ai entendu parler des puces à ADN mais je ne crois pas qu'il s'agit d'anticorps.  [...] En gros, les puces à ADN sont des petites lame de verre ou de nylon (comme celle de microscopie habituelle) sur lequel des milliers de fragments d'ADN son disposés de façon géométrique.  [...]

[Biologie Cellulaire] mesure de capture de glutamate sur coupes cérébrales

Les tranches était placées sur des inserts (ou une membrane de nylon) et j'incubais 15 min avec ma solution de glu-3H. Ensuite je prenais la membrane de nylon (avec la tranche dessus), je la plaçais sur le filtre whatmann dans une unité de filtration où on peut mettre 12 à 18 filtres (millipore) reliée à une pompe à vide.  [...] Pour arréter la capture, je faisais un double rinçage avec une solution sans sodium à 4°C (tu dois utiliser la même chose j'imagine pour mesurer la capture non spécifique). Et je mettais le tout (flitre whatmann, filtre nylon avec tranche) dans le scintillant puis au compteur.  [...]

[biologie moléculaire] Southern blot

est ce que tu utilises une nylon membrane combien de temps tu attends apres avoir directement pose ton dna sur la membrane comment tu le denatures (NaOH), fixe (UV light) et est ce que tu utilises une solution church pour prehybrider est ce que tu penses que c'est possible de m'envoyer ton protocole qui a marche.  [...] Je veux faire ca car apres je veux refaire la manip en deposant non pas de l'ADN sur la membrane mais une colonie de E.coli. Et le lavage par NaOH me servira non seulement a denaturer l'ADN mais aussi a casser la cellule (car je dois en fait faire un southern sur une library entiere de cellules..).  [...]

[Divers] Analyse statistique de données des puces ADN

Les maths et stats ne sont malheureusement pas parmi les matières que je préfère Je vais quand même devoir analyser des données issues des puces ADN. Mais je me retrouve un peu désarmé face à cette tache où je suis un peu trop nul en maths pour effectuer et interpréter une analyse statistique des microarrays.  [...] Je travaille sur des données issues de puces ADN nylon (marquage radioactif). J'ai 7 puces dont 4 controle et 3 marquées positivement à la maladie d'Epstein Barr (EBV). Et je cherche quels sont les genes différentiellement exprimés entre ces deux conditions.  [...]

[Biologie Moléculaire] Le plasmide a t'il l'insert?

Un peu dans le meme esprit, il y a aussi le colonie blot. Le principe est simple, tu repliques tes colonies sur une membrane de nylon, et tu procedes comme un southern blot avec une sonde specifique de ton gene (a condition evidemment que ta souche receptrice ne possede pas ce gene dans son chromosome...).  [...] Pourquoi ne pas faire une ou plusieurs mini prép d'ADN (en priquant une ou plusieurs colonies) et simplement faire une digestion suivie d'une migration sur gel d'agarose et voir si on insert est présent. Si oui repartir des bactéries qui ont intégré le bon plasmide avec insert et faire une maxi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Criblage d'une banque d'ADNc

ce qui me dérange dans cette methode c'est son intérêt, on peut très bien faire cette banque d'ADNc d'un tissu précis et dans une période précise pour chercher un ADNc précis sans passer par des milliers de phages avec des manipulations délicates puis l'étalage sur plusieurs boite.   [...] ...je pense qu'on pourrait directement étaler ces ADNc dans des boite avec la géllose molle puis faire un filtre de nylon pour avoir le transfert et travailler dans le propre ensuite la fixaton des olygonucléotides dégénérer, saturation, hybridation, lavage et autoradiographie.  [...]

[Microbiologie] coliforme

Voilà mon problème.En me limitant au seul dénombrement des coliformes en milieu BLBVB,je dois indiquer à quelles étapes et pour quel matériel doit-on utiliser l'autoclave.   [...] Je n'ai trouvé qu'une étape,celle où il faut stériliser par autoclave. le milieu de culture.Pour le reste on me parle de stérilisation par chaleur sèche(verrerie et materiel mécanique).   [...]

Polyamides et liaisons peptidiques

je voudrais savoir si un polyamide comme le nylon peut comporter des liaisons peptidiques.  [...] J'apporte simplement un schéma de la formule semi-développée en sus, montrant bien comme le dit Edelweiss le liasion peptidique Co-NH.   [...]