• Santé - ADN, Feuilles, Kit, Protocole, Dosage

[Biologie Moléculaire] Dosage d'ADN

J'ai réalisé des extractions d'ADN de feuilles de tomate avec un kit sigma et je cherche un protocole simple de dosage.  [...] le kit précise que le dosage spectro peut être fait mais rien de plus. il précise le ratio à obtenir. j'aurai voulu un protocole un peu plus précis.  [...]

PCR sur pseudomonas aeruginosa

J'ai un soucis pour effectuer des PCR sur pseudomonas aeruginosa. les PCR marchent une fois sur deux bien que j'utilise de la bétaine. On a déjà essayé de changer plein de choses par rapport à la procédure habituelle. (prendre des composants tout neuf ), augmenter la quantité d'ADN jusqu'à 35ng (.  [...] ), extraire l'ADN avec phénol et chloroforme, extraire l'ADN en rajoutant une étape avec du CTAB tout en ayant déjà testé certains kit d'extraction commo le DNeasy tissue kit de QIAGEN...Le problème touche uniquement Pseudomonas aeruginosa dont l'ADN semble se détériorer avec le temps mais on ne parvient pas à trouver un meilleur protocole d'extraction d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb migration ADNg sur gel

L'extraction se fait à l'aide du TriReagent. Pour le dosage (20µL d'ADN + 980µL d'eau stérile dans la cuve du spectro), j'obtiens des valeurs de DO de 0,105 pour prendre l'exemple sur un tube. Ce qui me donne une concentration de 262,5 µg/mL d'ADN. Or je dépose ensuite dans le puit d'un gel d'agarose 0,8% environ 10µL d'ADN+4µL de bleu de charge.  [...] Je ne fais pas de traitement spécial avec de la RNase. Je suis le protocole du kit qui est fait pour une isolation rapide d'ADN génomique de diverses espèces.  [...]

[Génétique] Réalisation PCR

Pouvez-vous me détailler les différentes étapes et procédures pour la réalisation d'une Pcr. Novice en travail de laboratoire, je dois réaliser le génotype des lignées de souris et j'aimerais connaitre les différentes étapes auparavant.   [...] J'ai un protocole maison pour faire de l'extraction d'ADN à partir de morceaux de queues de souris. Mais si tu as un kit d'extraction d'ADN génomique avec colonnes c'est aussi bien.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

j'ai testé plusieurs protocole d'extraction d'ARN (kit RNeasy, Chang et Al 1993, Reid et Al 2006) mais je n'obtiens pas un grand rendement (200ng/uL et en faisant 8 répliquat par échantillons j'obtiens au mieux 10ug...) Il m'en faudrais bien plus car après je dois synthétiser des cDNA et là il me faut 100 ng minimum d'ARNm.  [...] Au début du protocole de chang et Al, on doit incuber 10-15 min à 65°C, peut etre faut -il incuber plus longtemps, 30-45min (je reste sur ce protocole car kit presque épuisé, et protocole de la vigne= Reid et Al =contamination ADN avec un traitement à la DNAse...).  [...]

[Biotechnologie] Fragilisation d'une paroi de champignon

J'ai travaillé sur des Penicillium il y a quelques années de cela et on utilisait un kit d'extraction d'ADN fongique de chez... Sigma je crois. Mais bon, les rendements avaient l'air ridicule, vous aurez peut être besoin d'optimiser le protocole suivant la paroi de vos spores. Faudrait que je déterre mon rapport.  [...] Sinon la lyse mécanique par billes pourrait peut être t'aider, si vous avez dans ton labo un appareil qui agite fortement (genre un Bead beater).   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ADN Plasmodium

Je suis doctorant en parasitologie, une partie de mon travail repose sur la PCR de plasmodium. Le problème c'est que j'ai pas trouvé dans la bibliographie un protocole d'extraction d'ADN parasitaire depuis le sang total, j'ai trouvé seulement des méthodes utilisant des kit d'extraction tel que QUIgen.  [...] extraction de l'ADN totatal par l'un de ces deux protocole puis ensuite PCR avec des amorces spécifiques de Plasmodium, ca devrait faire l'affaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ADN, ARN et protéines

On c'est amusé à le faire une fois. C'était jouable. Cependant, pour une série de manip plus fréquente et plus grosse que quelques tubes je conseille aussi l'utilisation d'un kit. La manip est moins prise de tête et le résultat sans doute plus propre.  [...] je souhaite réaliser une extraction ADN génomique sans kit. Je voudrais savoir si quelqu'un a un protocole qui marche avec une quantité de l'ordre de 50 à 100 ng d'ADN extrait pour faire une PCR ensuite.  [...]

[Génétique] problème d'extraction d'ADN

ouii je vérifie la qualité de mon ADN directement après chaque extraction et les ratio de puretés sont bons autour de 1.8 mais enfaîte je conserve mes ADN dans un simple congélateur à -4 ° et même je ne met pas des inhibiteurs d'ADNase puisque j'utilise un kit d'extraction et pas un protocole de CTAB dont je peux mettre le Mg + EDTA.  [...] mais si ce n'est pas ca, alors essai de passer à un protocole genre trizol ou CTAB voir si tu as le même résultat, peut être que ton kit est optimal pour certains tissus mais pas sur le poisson, si tes extractons précédentes étaient sur un autre type tissulaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

Oula ^^, mon responsable est déjà contre le fait que je fasse des contrôles pendant les PCR, contre le fait que je test les primers dégénérés sur une espèce proches mais moins difficile, contre le fait que j'utilise un protocole établi par des chercheurs qui affirment que les autres protocols sont pas terrible sur cette plante, il est très très kit on dirait une parodie d'apple ^^, alors je crois que le gradient de Césium c'est pas la peine d'y penser,  [...] Sawordz, il s'agit de Invitrap Spin Plant Mini kit, de stratec molecular, mais le problème ne vient pas du kit en soi, je pense que c'est un très bon kit, lui a de bon résultats sur les plantes qu'il utilise, et avec ma plante j'obtiens par ailleurs une bonne courbe d'absorbance et un bon 260/280, mais juste le 260/230 pose problème, ma plante est connue pour être récalcitrante a de nombreux kit du a sa composition, et il y a plusieurs protocoles dans la litterature qui disent qu'il faut un protocole spéciaux pour elles, seulement comme mon 260/280 etait bon, il a insisté comme quoi c'était bon, malgré que mon 260/230 environne les 04-1.2.  [...]