• Santé - ADN, échantillon, Puits

[Biologie Moléculaire] Pcr-sbt

- il contient un colorant (bleu de bromophénol, oranger...) qui permet de suivre la migration à l'oeil nu (pour éviter que de faire migrer l'ADN trop longtemps et éviter qu'il ne sorte du gel...).  [...] - certains contiennent également des composants qui ont la particularité de se lier à l'ADN et d'en augmenter la densité. ainsi ton échantillon reste bien au fond du puits et ne se disperse pas dans le tampon de migration.  [...]

[Biologie Cellulaire] PCR et électrophorèse

Vous mélangez deux choses. il faut traditionnellement un tampon de réaction, qui permet le fonctionnement de l'enzyme, et un tampon de dépôt, qui permet de stabiliser l'ADN et de déposer l'échantillon dans le puits.  [...] Celui ci contient les deux, c'est à dire qu'on peut déposer le produit de réaction directement ensuite. La mise en évidence de l'ADN c'est une autre histoire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Cette technique se caractérise par ce qu'on appelle le Ct (ou Cq selon les appareils) il s'agit en fait du cycle auquel un puits dépasse un seuil théorique,  [...] Si on passe une gamme d'ADN, ie une série de puits dont on connait la quantité d'ADN mise dans chacun, on pourra établir une droite reliant la quantité d'ADN et le Ct (principe d'amplification de la PCR, cf wikipedia si des doutes là dessus). Ainsi en connaissant le Ct d'un échantillon, on pourra estimer la quantité d'ADN initiale. Et ça c'est une qPCR en Temps Réel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Pour le depot du DNA loading buffer 10x de S prime (j'ai changé de lot durant mes manip sans changement apperent des résultats), j'en met 1/9 de mon échantillon pour optenir la dilution du tampon de charge au 1x.  [...] Sels dans l'échantillon. J'ai une fois résolu le problème par hasard en oubliant de mettre le courant après avoir chargé mon gel avec des échantillons que je savais chargés en sel. Les échantillons étaient sagement restés dans les puits pendant 4 heures et, pendant ce temps là, le sel avait eu le temps de diffuser dans le tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

deuxième souci, quand j'ai essai de spoter l'ADN dans le puits de gel, il se diffuse directement en dehors de puits dans le liquide de mogration (TBE), après j'ai changé le tampon de charge, et c'était marché avec quelque échantillons.  [...] Le tampon de charge ne permet pas de précipiter l'ADN mais de le faire couler dans les puits. Êtes vous sure que vôtre système de migration ne présente pas un problème au niveau de la tension par exemple ou alors une électrode qui ne marcherait pas (est ce que ça fait des bulles).  [...]

[Génétique] Analyse plasmides recombinants/non recombinants

Ensuite, avec différents échantillons, on a fait pour A et B, une PCR, une digestion par EcoRI puis on a fait migrer ces deux produits dans un gel dagarose 1% avec l'ADN A et B non digéré. Au final on a 10 puits.  [...] Le probleme c'est que pour le puits 6 je ne sais pas quoi déduire... Pourquoi y a t il 2 bandes La bande a 3000 correspondrait à un excès de plasmides non recombinants et la bande a 6000 mon plasmide contenant l'insert Le soucis c'est que quand j'ai lysé les bactéries, je n'en n'ai vu aucune de bleue dans le culot contrairement à l'échantillon A.  [...]

[Biologie Moléculaire] électrophorèse en champ pulsé

Au niveau des puits si tu vois de la fluo (quel type de coloration utilise tu ) ca dois correspondre a de l'ADN maintenant est ce que la migration ne s'est pas bien passée Est tu sur be bien avoir orienté ton Gel As tu chargé assez d'ADN.  [...] j'ai coloré avec BET et j'ai bien orienté mon gel mais je vois de la fluorescance sur les puits sans avoir de migration par contre le marqueur de taille a bien migré.  [...]

[Biologie Moléculaire] élèctrophorèse (ADN)

Donc, si tu n'observes pas de bande dans un puits c'est que le poids moléculaire de l'ADN fragmenté n'est pas dans la fourchette de taille observable par le gel d'agarose calibré (autrement dit, ton ADN est tellement petit qu'il a pu passer a travers ce maille et que lors de la migration, il a carrément quitter le gel en migrant vers une électrode).  [...] Les fragments d'ADN ne restent pas sur le gel d'agarose d'où le fait que tu n'as pas plusieurs barre (sinon ça voudrait dire que les délétions dù aux UV donne des molécules d'ADN de tailles différentes) mais bien qu'une seul qui correspond à ton ADN qui est resté intacte (n'oublie pas que tu n'as pas qu'une seule molécule d'ADN dans un puit mais plusieurs).  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorese gel d'agarose

pour faire une electrophorese sur gel d agarose on prend du gel d agarose auquel tu rajoute du bet (bromur d ethidium) on fait un puit dns le gel (dans lequel on mettra l echantillon) on met l ensemble dans une solution (un tempon de migration).  [...] C'est pourquoi dans un des puits on verse une solution de marqueur de taille. C'est un cocktail de plusieurs ADN dont on connait la taille.  [...]

[Biochimie] Test de grossesse

Quand tu mets ton echantillon tu fais migrer un Ac-anti hcg (qui migre avec l'urine ou le sérum). Tu as donc soit l'ac anti hcg seul ou le complexe ag-ac si l'hormone est présente. Dans une première fenetre tu détectes l'ac antihcg (libre ou lié) il se forme le -.  [...] Je rappelle que les Ac antihcg migrent en même temps que ton échantillon (ils sont présents dans le fond du puits où tu mets l'échantillon).  [...]