• Santé - ADN, Coupe, Activité

[Biologie Moléculaire] Topo 1 et Topo 2 !!

Lors de la duplication du matériel génétique il se produit des phénomènes de torsions de l'ADN en aval de la fourche de réplication (processus physique lié à la structure de l'ADN). Pour éviter que l'ADN ne casse suite à ces contraintes physiques, la topoisomérase coupe un brin de l'ADN (activité hélicase) et le re-ligue ensuite (activité ligase).  [...] Pour faire simple les topoisomérases sont des enzymes permettant la dénaturation des super enroulements de l'ADN pour y permettre l'acces au materiel de réplication. pour ce faire il me semble que la topo 1 coupe un seul des 2 brins et défait les supertours négatifs sans énergie nécessaire et la topo 2 coupe les 2 brins d'ADN et défait les supertours négatifs et positifs avec consomation d'ATP.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réplication de l'ADN chez les eucaryotes SOS

dans mon cours il est écrit. une fois la réplication terminée sur de longs segments, une enzyme permet de remplacer les amorces ou de réparer les cassures. Cette enzyme fait partie de l'ADN polymérase I. Elle possède une activité exonucléase dans le sens 5'3'.  [...] Elle coupe le brin et retire les bases dans le sens 5'3'. Il y alors un OH et un P dans le vide. Ensuite, l'ADN polymérase I recommence à allonger le brin. Le fragment de Kleenow est une sous-unité de l'ADN polymérase I. Il a une activité polymérase 5'3' et une activité 3'5'.  [...]

fragment de klenow

Bon ben l'ADN polymérase I est une enzyme qui d'une part polymérise l'ADN à partir d'une matrice mais qui d'autre part coupe l'ADN grâce à une activité exonucléasique 5'-3'.  [...] Du coup elle coupe ce qu'elle synthétise. Pas terrible... En éliminant la partie de la protéine permettant l'activité exonucléasique on ne conserve que l'activité de polymérisation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction Banque ADNc

Normalement c'est le fragment de Klenow qu'on utilise généralement sous le terme ADN pol I, non L'ADN polymérase I est une enzyme qui d'une part polymérise l'ADN à partir d'une matrice mais qui d'autre part coupe l'ADN grâce à son activité exonucléasique 5'-3'.  [...] Du coup elle coupe ce qu'elle synthétise, ce qui n'est pas top =. on élimine la partie de la protéine permettant l'activité exonucléasique 5'-3' =. on ne conserve que l'activité de polymérisation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole digestion

derniere chose, n'oublie pas qu'il ne faut pas depasser 10% de ton volume total en enzyme de restriction. Sinon le glycerol qu'elles contiennent fini par totalement perturbé ta digestion (inhibition, activité star etc...).  [...] Le top pour la digestion (selon protocole promega/ NE Biolabs, teste et approuve par tout le labo) C'est 50 uL volume final (ADN purifie, pas tout juste sorti de PCR), et max 2 uL d'enzyme. Un volume plus petit ca coupe mal, et plus d'enzyme au mieux ca change rien, au pire ca coupe mal ou avec activite star.  [...]

Southern blot et séquençage - Interprétation

L'etude porte sur une portion du genome de deux enfants (individus 1 et 2) contenant un gene codant une enzyme importante dans le developpement musculaire. L'individu 1 presente un taux d'activite enzymatique normal. Pour l'individu 2 qui est malade, l'activite enzymatique est toujours tres faible.  [...] Donc on peut en déduire que cette mutation a coupé au niveau de ce site le fragment d'ADN de l'individu 2, ce qui explique le mauvais fonctionnement de son activité enzymatique.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzymes de restriction

Lorsqu'une enzyme de restriction a efficacement digéré un ADN, cet ADN est coupé en un ou plusieurs sites. Comment vérifier qu'un ADN est coupé Cette technique fonctionne-t-elle quelque soit mon type d'ADN (génomique, plasmidique, produit de PCR, etc.).  [...] Pour vérifier qu'un ADN est coupé, il faut le mettre en présence de désoxyribonucléotide fluorescents, si l'adn est coupé ces désoxyribonucléoitides vont se fixer sur l'extrémité 3'OH libre, est cela.  [...]

Science décalée : bientôt du porc génétiquement allégé

Pour introduire cette mutation chez les cochons, les chercheurs ont utilisé l' édition génomique, et plus précisément le système TALEN ( Transcription activator-like effector nuclease ). il s'agit d'une enzyme qui coupe l' ADN, attachée à une protéine qui se lie à l'ADN.  [...] La protéine guide l'enzyme de coupure vers un site particulier, ici le gène MSTN, et ensuite l'enzyme le coupe. Le système de réparation de la cellule répare ensuite l'ADN mais en commettant des erreurs, ce qui rend le gène non fonctionnel. Une cellule dans laquelle TALEN a rendu les deux copies du gène MSTN inactives a été transférée dans une cellule-oeuf qui a servi à créer 32 clones de petits cochons.  [...]

Première médicale : un patient traité par édition génomique

La protéine à doigt de zinc se lie à l'ADN et le coupe à un endroit précis. En utilisant le processus naturel de réparation de l'ADN, les cellules insèrent le gène correcteur pour l'IDS à cet endroit. Cette technique a pour avantage de ne pas insérer le gène au hasard dans le génome.  [...] Le système CRISPR-Cas9 est une technique particulièrement simple, peu coûteuse et efficace pour obtenir des cellules modifiées génétiquement. Il combine une enzyme qui coupe l'ADN avec une molécule servant de guide moléculaire pour diriger l'enzyme vers le site précis où il faut couper.  [...]

[Biologie Moléculaire] activite enzymes de restrictions

bonjour j'ai besoin d'aide s'il vous plait pour un exercice sur l'activité des enzymes de restrictions.  [...] afin de réaliser une banque de fragments d'ADNg double brin, on dispose de 20 µg d'ADNg que l'on digère par les enzymes de restrictions BaeGl ou Alul. Chacune de ces enzymes possède une activité de 10U/µL (1U coupe totalement 1µg de plasmide de 3000pb possèdant un site unique de restriction pour l'enzyme de restriction considéré en 1h à 37°C).  [...]