• Santé - ADN, Concentration, Volume

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN génomique

Et mon grand problème est que j'arrive pas à digérer une grande quantité d'ADN(200 Ml dans un volume de 500 Ml)mais dans un petit volume(10Ml dans 15Ml)j'arrive à digérer mon ADN...(concentration d'ADN est 400 ng/Ml).  [...] en suivant ce protocole, j'arrive à avoir une concentration d'ADN de 400 ng/Ml mais toujurs j'arrive pas à le digérer(dans un grand volume).  [...]

Estimation concentration gel agarose

Pour connaitre la concentration il faut utiliser un spectrophotomètre micro- volume (type Nanodrop), c'est la seule façon de réellement connaitre la quantité d' ADN présent.  [...] sans expérience il est aussi possible d'approximer en faisant une pseudo gamme a partir de concentrations d'ADN connues et comparer les tailles des bandes  [...] pas pratique, en gros je pense que c'est la raison pour laquelle tu as mis plusieurs quantité de geneRuler, tu regarde a quelle taille ta bande inconnue correspond par rapport au geneRuler et ensuite sachant que sur le tube du geneRuler ou sur la notice tu dois pouvoir trouver la quantité (soit la quantité par microlitres, soit la quantité totale et a ce moment tu divise par le volume du tube) puisque tu as la quantité d' ADN dans le tube de Ruler (quantité par microlitre) et que tu sais le volume que tu as déposé (2, 4 ou 6 microlitres), tu connais la quantité d' ADN pour chaque epaisseur de bande de Ruler que tu as déposé et ensuite tu en déduis la quantité de ta bande inconnu par rapport a la taille de la bande de chaque ruler dont tu connais maintenant la quantité déposée en nanogramme et la taille de ta bande de concentration inconnue,  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

J'utilise 1 microlitre (80ng/microlitre) de template ADN du coup comme ils précisent pas grand chose d'autre peut être que c'est trop pour un volume total de 25, mais comme pour 100 ils disent jusqu'à 20... sans préciser de concentration.  [...] Sinon perso pour les PCR je suis dans un volume de 50 µl avec 100 ng de d'ADN. Tu utilises quelle concentration pour tes primers.  [...]

[Biologie Moléculaire] travaux pratiques, isolation plasmide

L'éthanol 70% permet de faire précipiter l'ADN. On utilise d'abord de l'éthanol 96% (ou plus concentré) car on le rajoute en général à un volume de solution aqueuse qui contient l'ADN (souvent après une étape de phénol-chloroforme) et qui va diluer un peu l'éthanol.  [...] 1 µL d'enzyme ça ne veut pas dire grand chose... Il faudrait connaître la concentration de PstI et elle est écrite sur le tube normalement. La concentration des enzymes de restriction est souvent de 10 ou 20 (parfois 50) U/µL. U est l'abréviation pour unité (d'enzyme) et par définition, une unité permet de digérer 1 µg d'ADN en 1 heure à 37°C et dans un volume final de 50 µL.  [...]

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse

On peut alors dire combien il y a d'ADN dans la bande du puits 1 ou 3 de même intensité, et sachant quel volume on a déposé dans le puits, on peut alors savoir quelle concentration on avait dans le tube, et donc la quantité d'ADN qu'on avait à la sortie de la PCR.  [...] Sur le principe je ne pense pas avoir compris de travers, c'est surtout sur la determination de la quantité d'ADN dans chaque bande du marqueur qu'il y a quelque chose qui m'échappe. J'essaie de faire logiquement mais à chaque méthode personnelle je trouve un truc différent au bout.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN

petite précision, l'ADN absorbe les UV a 260 nm, donc je suis sur de la longueur d'onde que j'ai choisi pour la lecture de la densité optique.De plus je trouve que l'expression de la concentration se fait par microlitre indépendamment du volume final du moment que chaque ul contient une quantité donné d'ADN.  [...] pour toute utilisation ultérieur (PCR) par exemple,on nous demande de prendre 2ul d'ADN concentré à 10ng/ul c'est pour cela je vous dit que le plus important c'est la concentration dans un volume donné (1ul).  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification d'ARN

Je suis en première année de thèse et après mon extraction d'ARN, j'ai une concentration de 8 ng/µL environ, dans un volume final de 11 µL (kit PicoPure de chez Arcturus, après microdissection). Je voudrais amplifier mes ARN car je dois étudier une dizaine de gènes en PCR temps réel, donc je n'aurai pas assez de matériel de départ (car il faut environ 50 ng d'ADN par puits...).  [...] Pour cela j'ai trouvé un kit Ambion. MessageAmp, super mais le truc c'est qu'il est très cher.. 1100 € pour 20 réactions.   [...]

Ajuster la concentration d'ADN

Où Ci est la concentration initiale, que tu dois connaitre (mesurer au nanodrop par exemple). Vi est l'inconnu, c'est le volume que tu dois prendre pour réaliser ta dilution.  [...] Cf est la concentration finale, c'est toi qui dois la fixer. Pour l'ADN, le plus pratique si c'est possible est de fixer à 1gamma, soit 1mg/ml (ou ug/ul, c'est la même chose...). Mais c'est toi qui choisis... Vf est le volume final de la réaction, c'est encore toi qui choisit.  [...]

[Biologie Moléculaire] precipitation ADN

Ce qui doit être écrit dans votre protocole c'est que l'on reprend un volume V d'ADN dans 2V d'éthanol absolu non Si l'on fait le calcul, la concentration finale en ethanol est ~70%.  [...] J'avais jamais réfléchi à pourquoi 2 volume d'EtOH... mais alors la qualité de précipitation est elle très influencée par le pourcentage en EtOH 70% final est ce le min, le max ou une valeur intermédiaire pour être tranquille.  [...]

Concentration

En 1.4.1.B, tu connais le nombre de moles d'ADN par cellule. Tu connais aussi le nombre de cellules de l'organisme. Donc tu en tires le nombre de moles d'ADN dans l'organisme. Et tu divises par le volume de 69.31 L. Tu obtiens la concentration molaire en ADN dans le corps complet.  [...] En 1.4.2.A, il faut tenir compte de la masse molaire du glucose C6H12O6, qui vaut 180 g/mol. En partant de la valeur minimum de 3.9 mmol/L, il y a en tout une concentration massique de 3.9 · 180 mg de glucose par litre, et donc une masse totale de 3.9 · 180 · 2.8 milligrammes de glucose dans le plasma.  [...]