• Santé - ADN, Complexe, Plasmide

[biologie moléculaire] PCR à partir d'ADN génomique

Il arrive que des sites d'hybridation aspécifique trop nombreux perturbent la PCR (l'ADN génomique est une matrice plus complexe qu'un gène cloné dans un plasmide).  [...] ... Sinon j'ai essayé avec 50 et 100 ng et toujours rien... donc effectivement je doute de plus en plus de mes amorces... mais comment vérifier sans plasmide tout est là.  [...]

[Génétique] plasmide ADN distinct de l'ADN chromosomique

j'ai pas bien compris la définition du plasmide,surtout quand ils disent que c'est une molécule d' ADN distinct de l'ADN chromosomique.  [...] La principale différence entre le chromosome et le plasmide est que le chromosome porte les gènes essentiels pour la survie de la cellule, alors que les plasmides ne sont pas indispensables. Ils permettent surtout à la cellule de mieux s'adapter à son environnement, et on y trouve généralement des gènes de résistance à des antibiotiques, ou des gènes impliqués dans le pouvoir pathogène de la cellule.  [...]

[Biologie Moléculaire] Digestion enzymatique

1- Si l'on considère que 5 ug d'ADN plasmide de pUC19/GFP a été complètement digéré (par EcoRI), il est donc possible de calculer la quantité théorique d'ADN du gène de GFP que l'on peut isoler sur un gel d'agarose. Comment procéder Quelle sera la quantité obtenue du gène GFP si l'on considère que le rendement d'isolement d'ADN (en l'occurence 5 ug) sur gel d'agarose est de 90%.  [...] 2- Il existe plusieurs tampons 10X de digestion enzymatique différents. De quelle façon choisit-on celui qui dooit être utilisé dans notre expérience.   [...]

[Génétique] Question qui me tracasse beaucoup ( information génétique )

Parce que imaginons qu'on coupe une séquence ( TAAGCG ) du plasmide on prendra une séquence de l'ADN étranger mais qui a les même bases azotées pour qu'elle soit complémentaire avec l'autre brin du plasmide parce que si on prendre d'autres bases, il n'y aura pas complémentarité ( G avec C, T avec A ).  [...] concernant ce point, si on enlève TTAGCC, on enlève aussi ce qu'il y a en face (AATCGG). Si on met une autre séquence dans ce plasmide, elle sera double brins (complémentaires l'un de l'autre) et n'aura rien à voir avec la séquence enlevée.  [...]

[Biochimie] Calcul d'une concentration en ADN

Je suis peut être en train de bloquer sur quelque chose de simple mais je ne vois pas du tout comment faire, et pourtant j'y ai réfléchi. On sait également que le plasmide est de 3500pb, mais je ne vois pas en quoi cela nous aide. 3500pb peut-il correspondre à la quantité d'ADN en moles.  [...] J'ai compris comment déterminer la masse d'ADN présent dans la solution, à partir de la masse d'unités osidique. J'ai également compris comment déterminer la quantité de matière de plasmide à partir de la taille de celui-ci et je vous en remercie d'ailleurs car c'était pas gagné.  [...]

[Biologie Moléculaire] Créer un plasmide...?

Sauf erreur de ma part (mais j'en suis presque sur), Craig Venter n'a pas cree un genome complet, il s'est contente de le re-assembler et de le mettre dans une cellule vide puis de le re-activer. Tu veux reellement creer un plasmide c'est a dire sans utiliser d'ADN deja existant A mon avis le plus simple est de faire synthetiser des oligos d'une centaines de pb, de les cloner bout a bout dans un plasmide connu, puis de virer la partie connue et de re-liguer ton super plasmide tout nouveau sur lui meme.  [...] Tu veux reellement creer un plasmide c'est a dire sans utiliser d'ADN deja existant A mon avis le plus simple est de faire synthetiser des oligos d'une centaines de pb, de les cloner bout a bout dans un plasmide connu, puis de virer la partie connue et de re-liguer ton super plasmide tout nouveau sur lui meme.  [...]

[Biotechnologie] Problèmes sur les notions/calculs de plasmide

Aussi je pense que pour la 2ème partie de l'énoncé càd pour la taille de l'insert pour chacune des 2 banques. J'ai fait 13942(plasmide plus insert) - 12337 (ce qui correspond à la taille du plasmide) et j'obtiens 1605 paires de bases pour la banque d'ADN génomique et 1024 pour labanque d'ADN complémentaire.  [...] De même pour la banque d'ADN génomique, je m'étais trompée dans mon calcul et j'ai donc les mêmes valeurs que vous pour plasmide + insert pour les 2 banques et j'obtiens donc 2505 paires de bases pour la banque d4ADN génomique et 1024 paires de bases pour la banque d'ADN complémentaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

- bruit de fond dû à l'ADN non digéré ou digéré par une seule enzyme. nombre de colonies / µg d'ADN de plasmide digéré incubé avec la ligase.  [...] prq ajouter de l'insert avec du plasmide mais sans ligase, c'etait ca la reflexion. sachant qu'on a deja un controle plasmide sans ligase et plasmide + ligase, ce qui permettra, comme tu le dis, de verifier entre autre l'activite de la ligase mais surtout que le vecteur est bien digere.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transformation levure

afin de transformer des levures avec un plasmide linéarisé+cDNA pour le recombiner, on a ajouté de l' ADN dénaturé (de thymus de veau) pour favoriser la transformation. Cet ADN aurait une fonction de carrier, mais je ne comprends pas trop comment ça marche, si qlq un peut m eclairer.  [...] cet ADN protège ton plasmide de la dégradation, car il est beaucoup plus abondant que le plasmide. Donc les nucleases vont en premier le dégrader.  [...]

Plasmide recombinant

Ton plasmide a été coupé par deux enzymes de restriction différentes, on ligue ensuite un insert. S'il s'agit d'une rétrotranscription d'un ARNm, on parle d'ADN complémentaire et pas d'ADN copie. Pour la compréhension de ton exercice, je pense qu'on s'en fiche de savoir d'où vient cet ADN à liguer.  [...] Après ligation de ton plasmide, si tu le redigères, les fragments générés ne sont plus les mêmes qu'au départ. Tu as perdu un bout de plasmide, celui qui se trouvait entre les deux sites de restriction utilisés à la base, et ça a été remplacé par ton insert.  [...]