• Santé - ADN, But, étape

[Biochimie] enzyme "détruite" à haute température?

On dérive hors-sujet... Rapidement pour que ce soit clair, la première étape de dénaturation de la PCR est bien plus longue (2-5 minutes à 95°C) que ce qui est nécessaire pour dénaturer l'ADN, 15-20 secondes à 95°C que l'on retrouve dans tous les cycles. La première étape est nécessaire pour activer les Hot Start qui ont l'avantage de ne pas être actives tant que cette étape n'est pas effectuée, elles ne dégradent donc pas les primers avec leur activité correctrice le temps de lancer la PCR.  [...] La dénaturation de l'ADN n'est pas le but de cette étape, il y a toujours une étape de ce type et qui sera répété lors du cycle même. Cette étape d'activation n'a lieu qu'une fois au début de la PCR.  [...]

Utilité de la PCR en médecine ?

D'abord, elle peut être une fin en soit, càd que le résultat de la PCR permet de poser un diagnostic qualitatif. Une personne est malade, on suspecte la bactérie X dans le LCR par exemple. on fait une PCR qui vise à détecter l'ADN de la bactérie X. Si rien n'a été amplifié, c'est que la bactérie n'est pas là (la personne est malade à cause d'autre chose.  [...] Sinon, la PCR peut être une étape nécessaire au diagnostic et le but est bien d'obtenir un grand nombre de fragments d'ADN pour ensuite le séquencer par exemple, et là c'est le séquençage qui répond à ta question, pas la PCR elle-même qui n'a été qu'un outil d'amplification.  [...]

La résistance du virus du Sida à l'AZT est enfin élucidée

L'AZT est un inhibiteur de la transcriptase inverse du virus. Celle-ci est une enzyme virale qui a pour but de rétro-transcrire l'ARN génomique viral en ADN. Cette étape du cycle viral, qui se produit dans la capside, est cruciale puisque c'est elle qui lui permet ensuite de s'insérer dans le génome des cellules infectées et de se multiplier.  [...] Les chercheurs de l' université Rutgers (New Jersey) ont réussi l'exploit de déterminer par cristallographie la structure moléculaire de cinq complexes différents. Ces complexes impliquent l'enzyme virale de la transcriptase inverse (sensible ou résistante à l'AZT), l'ADN, la molécule d'AZT et l'ATP.  [...]

[Biologie Moléculaire] lors de la purification de l'ADN plasmidique

je voudrais savoir est ce que le phenol-chloroforme appartient au étapes de la purification de l'ADN ou la précipitation de ceci par l'éthanol reste la dernière étape de la purification.  [...] l'étape de phénol/chloroforme permet de faire précipités les débris cellulaire et les protéines pour s'en débarrasser. Cette étape est généralement suivie d'une étape de chloroforme pure qui permet de ce débarrasser d'éventuelles trace de phénol. Enfin, l'ADN est précipitée par un mélange éthanol 100% + sel, à froid.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Quand au gel, un simple gel d'agarose fait l'affaire, le tampon de migration phosphate est bon aussi. je crois qu'il est également possible de marquer l'ADN à l'aide de nitrate d'argent (vieux matériel photographique). Bref, à part l'étape de PCR, tout est théoriquement faisable dans la cuisine (ultra-propre pour éviter les contaminations ).  [...] Cependant, les méthodes d'aujourd'hui permettent (parfois) de sauter l'étape d'extraction de l'ADN. On passe directement à l'étape de PCR, où les cellules sont lysées et l'ADN libéré lors de la première étape. On peut donc diminuer ce temps à 6H (voir même à 4H en étant -très- pressé).  [...]

apoptose cellulaire / fragmentation de l'ADN

Une partie de l'étude va être sur l'ADN fragmenté, sauf que sur le protocole que j'ai, à aucun moment il n'y a d'étape pouvant libérer l'ADN.  [...] Je pensais rajouter une étape SDS-HCl après la 1ère centri, mélanger doucement, centri et là récupérer le surnageant contenant l'ADN (si je ne me trompe pas) et faire migrer ça même si l'extrait n'est pas pur, je veux juste voir l'état de mon ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Solution Q du kit Qiagen

Il y a effectivement aussi une étape a la DNase. Mais celle-ci n'est cependant pas obligatoire. tout dépend de la manip que tu veux réaliser après avoir extrait tes ARN. Si avoir un peu d'ADN ne dérange pas, alors tu peux passer sur cette étape.  [...] -les tampons RLT et RW1 contiennent du guanidium isothiocyanate. C'est un sel chaotropique qui en milieu acide et alcoolique attire les molécules d'eau permettant une réaction d'adsorption des acides nucléiques sur la silice. Ici, les particules de silice sont disposées sur colonne et la séparation s'effectue par centrifugation.   [...]

[Microbiologie] Qu'est ce qu'un rétrovirus ?

de la meme maniere que contre des virus non retroviraux... c'est le systeme immunitaire qui s'en charge. Seulement on a eventuellement plus de cibles therapeutiques, vu que l'etape de retrotranscription ARN-. ADN est specifique au virus, et n'existe pas dans nos cellules, c'est une cible de choix pour bloquer le virus.  [...] Celui là c'est un virus ssARN brin positif (sans étape ADN) qui appartient aux Flavivirus comme West Nile ou l'agent de la fièvre jaune.  [...]

Intégration de VIH-1 dans la chromatine: la chute d'un dogme.

Lors d'une infection par VIH-1, une étape clé du cycle est l'intégration de l'ADN viral (qui vient d'être retro-transcrit) dans l'ADN de la cellule infectée. Cette étape est catalysée par l'intégrase virale.  [...] Je suppose donc que les étapes où le VIH a besoin d'interagir physiquement avec l'hôte au cours de son cycle sont de bonnes stratégies thérapeutiques. En effet, même si le virus peut muter tant qu'il veut tant que ses différentes fonctions sont préservées, il ne peut pas muter les zones d'interactions avec l'hôte sous peine de ne plus pouvoir interagir avec les protéines concernées (vaste hypothèse à confirmer ou infirmer).  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique de laboratoire en biologie moléculaire

Je connais bien le Q-PCR pour en avoir fait tout l'été et j'avoue que pour quantifier cette technique est reproductive et très efficace. En fait pour préciser, je cherche n'importe quelles techniques originales autant pour amplifier, intégrer, exprimé et détecter ADN et ARN.  [...] Cette première étape est suivie d'une étape de dénaturation - renaturation afin de créer des hétéro- et homoduplexes à partir des deux populations présentes dans la PCR Pour rechercher un polymorphisme homozygote, il faut procéder de la même manière en mélangeant au préalable une population d'ADN sauvage à une population d'ADN polymorphe pour obtenir des hétéroduplexes après l'étape de dénaturation - renaturation.  [...]