• Santé - ADN, Amorces, Réaction

[Biologie Moléculaire] ADNc simple, double brins et PCR

Ce qui m'échappe un peu, c'est à quel moment se fait la synthèse de deuxième brin de l'ADNc et comment la Taq décide ou sait qu'il manque un deuxième brin qu'il faut synthétiser avant de procéder à l'amplification du fragment délimité par 2 amorces présent dans la réaction.  [...] Autrement dit, dans une réaction PCR classique et à partir d'ADNc simple brin, la Taq synthèsera d'abord le deuxième brin d'ADNc avant d'amplifier le fragment délimité par un couple d'amorces utilisés dans cette réaction Ou bien, une fois qu'on a la Taq, elle prend l'ADN (simple ou double brin) comme matrice pour synthétiser un autre brin et ainsi de suite.  [...]

[Génétique] PCR, marqueurs moléculaires

Comme cela vous a été signalé dans un autre message, il est IMPERATIF de faire preuve de courtoisie dan iles messages, ainsi que d'utiliser des titres EXPLICITES. Ceci est un avertissement et les messages ne respectant pas ces consignes seront supprimés, à l'avenir.   [...] C'est très simple en faite, la PCR veut dire Réaction en Chaine de la Polymérase, quand tu souhaites amplifier un fragment d'ADN d'une certaine taille en kb, tu peux avec des amorces, les 4dNTP, une polymérase thermorésistante et l'ADN double brin et le processus qui s'en suit, obtenir après un certain nombre de cycle, ta molécule d'intérêt en grande quantité.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR classique - PCR en temps réel !

Est ce que le principe de la PCR en temps réel est le même que celui de la PCR classique, et la seule différence est au niveau de l'analyse des produits amplifiés ( les amorces de l'ADN) ou il y'a une autre différence ou que j'ai rien compris du tout et que j'avais l'impression.  [...] La PCR, polymerase chain reaction, est un ensemble de réaction visant à amplifier un fragment d'ADN recherché. Pour faire court, on prend des amorces (Brins d'ARN) qui iront s'hybrider au début et à la fin du fragment que l'on veut amplifier. Grâce à une polymérase (Taq.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amorce sens et antisens

l'amorce antisens et complementaire à la sequence cible pourtant les 2 amorces doivent hybrider avec l'ADN complémentaire pour débuter la réaction PCR.Je ne sais pas est ce que ma question est claire ou non mais lors de la comparaison de mais amorces avec les sequence cibles sur le site NCBI voila ce que j'ai trouvé.  [...] De rien, j'avais eu aussi le même problème sur la répartition des amorces au départ la première fois qu'un prof me l'a expliqué en 4min 30.  [...]

[Génétique] Polymerase chain reaction

Tout d'abord, lorsque l ont effectue une PCR (polymerase chain reaction) a partir d un brin d adn, on dénature le brin et on l'hybride a deux amorces. l'amorce F va dans le sens et la R dans l antisens. Mais sur un brin d adn, qu est cr qui nous permet de savoir quel est le sens et l antisens.  [...] Pour la qPCR, lorsqu'on est en phase d'amplification, c'est à dire avant de saturer le système, la quantité d'ADN néosynthétisée par la réaction est proportionnelle à la quantité initiale (plus il y en a au début, plus on en amplifie, plus on le détecte tôt).  [...]

[Biologie Moléculaire] Réplication de l'ADN chez les eucaryotes SOS

Par ailleurs, il est dit qu'il a une activité polymérase 5'3' et une activité exonucléase 3'5'. s'il possède de telles activités enzymatiques cela signifie que c'est une enzyme Si c'est bien le cas quesque son activité polymérase 5'3' Et son activité exonucléase 3'5' Cette dernière ne peut plus correspondre au passage d'amorces d'ARN en amorces d'ADN puisqu'il n'y a plus d'amorces d'ARN après la réplication, alors quesque cette fonction.  [...] En plus clair la dernière question correspond au fait que dans la synthèse d'ADN chez les procaryotes l'exonucléase 5'3' n'a que la fonction de dégrader les amorces d'ARN et c'est l'ADN pol I qui les synthétisent en amorces d'ADN (d'après mon cours), donc ce que je voudrais savoir si en fait ma pensée est juste.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Alors, pour synthétiser le brin complémentaire pendant la PCR, il faut des bases azotées (dNTP, les mono-nucléotides), des amorces pour ne répliquer qu'une partie de l'ADN (qui doit correspondre à la partie que tu veux explorer), et un milieu favorable pour que les enzymes de réplication fonctionnent bien (c'est le buffer, qui contient souvent du MgCL2).  [...] L'enzyme va copier l'ADN entre ces deux amorces. Elle a besoin de bases/nucléotides. dATP, dTTP, dGTP, dCTP. Elle ajoute donc bout à bout chaque base depuis l'amorce de départ jusqu'à l'amorce de fin. D'où l'utilisation de la Taq polymérase, des amorces et des dNTP.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tm mystère des amorces PCR

[ Pour ceux qui ne connaissent pas la PCR multiplex, il s'agit de mélanger à la réaction de PCR, 1 amorce forward genre spécifique (qui se fixe sur l'ADN qq soit l'espèce) et 3 amorces reverse espèces spécifiques.].  [...] Je fais de l'identification d'insecte. Je n'ai qu'un seul ADN (inconnu donc) et je cherche à savoir s'il appartient à l'une des 3 espèces ciblées. Je n'ai pas de bouillon, ni de mélanges, donc normalement pas de risques d'amplifications aspécifiques. Mon principal souci demeure dans une hybridation capricieuse des amorces.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Après il est aussi possible que les contaminations observées ne proviennent pas d'un des réactifs mais simplement du fait de la manipulation de l'ADN a proximité du contrôle négatif. Ca peut expliquer pourquoi dans une PCR sans ADN tout soit blanc.  [...] Le bleu de bromophénol est juste un colorant qui migre comme l'ADN pour suivre l'avancement de la migration. C'est une petite molécule qui migre a peu près à la même vitesse qu'un petit fragment d'ADN. Les bandes d'ADN que tu vois sont les amorces non utilisées dans la réaction et se retrouvent a peu pres a la hauteur du bleu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réplication

Si les ADN polymérases réalisent les liaisons phosphodiester, alors à quoi servent les ligases A ressouder les amorces remplacées par de l'ADN à l'ADN préexistant.  [...] de ce que j'en sais, l'ADN ligase sert surtout à fermer les césure finales. Une fois que toutes les amorces ARN ont été éliminé suite au passage de l'ADN polymérase, cette dernière se détache et l'ADN ligase se fixe pour finir les brins. (Donc surtout en fin de réplication je pense, après il y peut être cette relation avec les amorces, je regarde de ce côté là.).  [...]