• Santé - Activité, Promoteur, Expression

[Biochimie] principe du gene rapporteur, sonde

on prend un gene dont on ne connait pas l'expression, on le combine avec un gene qu'on connait (ex.luciferase), on l'introduit dans la cellule (avec un virus par ex) et on regarde la quantité de lumière produite, celle ci étant proportionnelle à l'activité de la luciférase et donc du gene inconnu.  [...] La quantité d'oxyluciférine produite est proportionnelle à l'activité de la luciférase donc à l'activité du promoteur du gène rapporteur ainsi que du gène dont l'on cherche à mesurer l'expression.  [...]

[Biologie Moléculaire] promoteur sequence regulatrice et activité CAT

mon exo consiste en la transfection de cellules utérines par un plasmide contenant un gène CAT,un promoteur eucaryote et des séquences cis régulatrices en amont du promoteur.  [...] C'est l'effet de l'E2 ou de la progesterone sur l'expression du promoteur qui est étudié. L'interaction de E2 ou de la progesterone sur les séquences régulatrices cis peut entrainer une modification de l'expression du promoteur et donc de l'activité CAT (comme dans le cas de l'estradiol).  [...]

[Biologie Moléculaire] organisation plasmide

Non il ne faut pas aller chercher trop loin. Si c'est un plasmide RAPPORTEUR, on veut mesurer l'ACTIVITE d'un PROMOTEUR en mesurant indirectement l'expression d'un gène quantifiable comme ß-galactosidase. Dans ce cas la, on a besoin DU PROMOTEUR d'intérêt et c'est lui que l'on clone dans le MCS en AMONT du gène rapporteur.  [...] on veut mesurer l'ACTIVITE d'un PROMOTEUR en mesurant indirectement l'expression d'un gène quantifiable comme ß-galactosidase.  [...]

mesure de l'expression d'un gene

d'ailleurs la PCR quantitative est plus fine que le run-ON et je suis d'accord avec les objections d'Igothigh, n'etant pas dans des conditions physiologiques le taux obtenus n'aura aucun sens biologique. D'ailleurs si tu utilises le promoteur natif du gene comment compte tu faire ton run-on sans purifier la polymerase et les proteines accessoires necessaires.  [...] Je confirme que pour analyser rapidement la taux d'expression d'une protéine particulière, on utilise le western blot (WB). C'est une technique facile à mettre en oeuvre, éprouvée, qui permet de faire des comparaisons très rapidement (plusieurs échantillons en même temps) et relativement rapide.  [...]

régulation métabolisme des glucide

Pour le glucagon et PEPCK, il n'induit pas son activité directement mais son expression. Renseignez vous sur la voie de signalisation du glucagon. Si je vous dit que le promoteur de la PEPCK contient un élément dit cyclic AMPc Response Element ou CRE, vous devriez réussir a faire le lien entre les deux.  [...] en + des récepteur Glut qui font entré le glc ds la cellule y'a l'action importante de l'hexokinase. enzyme qui phosphoryl le glc en G6P (glc 6 phosphate ) à PM élvé, pour empêcher sa fuite de la cellule.   [...]

[Biologie Moléculaire] différence entre 2 plasmides

Un plasmide d'expression est un plasmide qui une fois entré dans la cellule permet de produire une protéine alors qu'un plasmide reporter est une construction qui va permettre de reporter l'activité de la protéine synthétisée par le plasmide d'expression. Il s'agit le plus souvent d'un promoteur qui répond à la protéine produite qui est donc un facteur de transcription.  [...] Si la protéine se fixe sur le promoteur elle va induire la transcription et la traduction d'une protéine rapporteur le plus souvent la luciférase qui émet de la lumière. L'activité de la protéine testée va donc être rapportée par la quantité de lumière émise.  [...]

[biologie moléculaire] Opéron lactose

L'IPTG est utilisée notement en biotechnologie dans les cas de productions de protéines recombinantes par un vecteur d'expression que l'on fabriquera avec un gène d'une protéine fusion (le gène lacZ ds ce cas ci) qui permettra une lecture du gène controlée et donc une production controlée de la protéine cible.  [...] C'est là que je ne suis pas sur, mais il me semble que dans certains vecteurs d'expression, le gène LacZ est placé sous le contrôlé d'un promoteur. Ce promoteur nécessite de l'IPTG pour s'activer.  [...]

[Biologie Cellulaire] Receptor Binding Domain dans une experience de signalisation cellulaire

Je m'explique. apparemment on lie ce receptor binding domain au promoteur de FT, ainsi ils fonctionneront en même temps. Comme le receptor binding domain ne fonctionne qu'en présence de dex (pourquoi.) on pourra étudier la production de FT.  [...] En fait c'est simple quand on connait le truc, ils ont utilisé pour exprimer leur gène un promoteur inductible et non un promoteur constitutif (genre 35 S). Le promoteur est inductible à la dexaméthazone (DEX. corticoïde), donc pour induire l'expression de ton gène il faut activer le promoteur par du DEX.  [...]

[Biotechnologie] Induction vs. expression

Par exemple, tu va avoir une séquence avec un promoteur inductible, qui une fois activé induira l'expression de la protéine en amont de la séquence.  [...] Si j'ai une souche ne portant pas de système d'expression dépendant de l'induction à l'IPTG, c'est mal barré Puis, faut aussi voir que dans la souche d'expression en question l'IPTG doit induire préférentiellement le promoteur dont est dépendant le gène d'intérêt.  [...]

Expression d'un gène

Je ne saisis pas bien la notion d'expression du gène. Quand un gène s'exprime réellement Est-ce durant la traduction, à la création de la protéine.  [...] Certains gènes sont exprimés continuellement au même taux, d'autres voient ce taux varier (ex. les protéines de choc, hsp). Ces derniers sont exprimés très faiblement en temps normal, et en cas de choc, le promoteur sera activé par un facteur qui permettra une expression très amplifiée.  [...]